12，盘管试漏方法有哪两种？
答：①气压试验：先在发酵罐内放满清水，用压缩空气通入管子，观察水面有无气泡产生以确定管子有否渗漏和渗漏的部位。气压法快速方便，但管子下部弯曲处积水不易排尽，有漏孔时不产生气泡就难以发现。  ②水压试验：用手动泵或试压齿轮泵将水逐渐压入冷却管，泵到一定压力时，观察管子有否渗漏现象
14，何谓死角所谓死角是指灭菌时因某些原因使灭菌温度达不到或不易达到的局部地区。
发酵罐及其管路如有死角存在，则死角内潜伏的杂菌不易杀死，会造成连续染菌，影响生产的正常进行。
17，预防噬菌体感染的措施有哪些
答：①发酵罐的排气管要用汽封或引入药液(如高锰酸钾、漂白粉或石灰水等溶液)槽中。
②取样、洗罐或倒罐的带菌液体要处理后才允许排入下水道（！）。③把好种子关，实现严格的无菌操作。④搞好生产场地的环境卫生。车间四周要经常进行检查，如发现噬菌体即时用药液喷洒。
解决措施
总之，出现染菌情况后要合理分析，然后一个个排除。
对于设备方面，新设备使用前要先空培养，定期更换空气过滤器，要着重注意设备内有无死角，管道阀门是否泄露，缩小目标，分段排除；对于操作方面，要对洗罐，接种，取样等操作严格操作。且要定期取样。发生染菌之后要对染菌发酵罐进行熏罐或煮罐处理，然后通过空培养进一步确证染菌的原因。学会找交集
1、下游加工过程的定义
发酵产品系通过微生物发酵过程、酶反应过程或动植物细胞大量培养获得。从上述发酵液、反应液或培养液中分离、精制有关产品的过程称为下游加工过程(Down stream processing)。它由一些化学工程的单几操作组成，但由于生物物质的特性，有其特殊要求，而且其中某些单元操作一般化学工业中应用较少。
2、下游加工过程的特点
培养液(或发酵液)是复杂的多相系统，含有细胞、代谢产物和末用完的培养基等。分散在其中的固体和胶状物质，具可压缩性，其密度又和液体相近，加上粘度很大，属非牛顿性液体，使从培养液中分离固体很困难。
培养液中所欲欲提取的生物物质浓度很低，但杂质含量却很高，特别是利用基因工程方法产生的蛋白质常常伴有大量性质相近的杂质蛋白质。
另一个特点是欲提取的生物物质通常很不稳定、遇热、极端pH、有机溶剂会引起失活或分解。
发酵或培养都是分批操作、生物变异性大，各批发酵液不尽相同，要求下游加工有一定的弹性。
3、 对一具体发酵产品，在确定其下游加工工艺时应考虑哪些因素
1，物理性质：（1）力学性质：重力、离心力、筛分；（2）热力学性质：状态变化、相平衡；（3）传质性质：粘度、扩散、热扩散；（4）电磁性质：电泳、电渗析、磁化；
2，化学性质：（1）化学热力学；化学平衡；（2）反应动力学：反应速率；（3）光化学性质：激光激发、离子化；
3，生物学性质：（1）分子识别：生物亲和作用、生物学识别；（2）输送性质：生物膜输送；（3）反应、响应、控制：酶反应、免疫系统。
5， 发酵液凝聚和絮凝的机理
凝聚是在中性盐作用下，由于双电层排斥电位的降低，而使胶体体系不稳定的现象。絮凝是指在某些高分子絮凝剂存在下，基于架桥作用，使胶粒形成粗大的絮凝团的过程，是一种以物理的集合为主的过程。
机理：解质将胶体粒子表面上的电荷中和，减少存在于胶体粒子间的静电斥力，使伦敦•范德华(London—Vander waals)吸引力占优势，这样胶体就会凝聚成较大、较密实的粒子，或在某些高分子絮凝剂存在下，基于架桥作用，使胶粒形成粗大的絮凝团使之更容易过滤。
6， 影响絮凝因素有哪些
絮凝效果与絮凝剂的加量、分子量和类型，溶液的pH，搅拌速度和时间等因素有关。
在絮凝过程中，常需加入一定的助凝剂以增加絮凝效果。料液中，絮凝剂浓度增加有助于架桥充分，但是过多的加量反而会引起吸附饱和，在每个胶粒上形成覆盖层而使胶粒产生再次稳定现象。如淀粉酶发酵液的絮凝试验中，絮凝剂加量对絮凝效果(滤速)的影响如下图所示。适宜的加量通常由实验得出，虽然高分子絮凝剂分子量提高，链增长，可使架桥效果明显，但是，分子量不能超过一定的限度，因为随分子量提高，高分子絮凝 剂的水溶性降低，因此分子量的选择应适当。
溶液pH的变化常会影响离子型絮凝剂中功能团的电离度，从而影响分子链的伸展形态。电离度增大，由于链节上相邻离子基团间的电排斥作用，而使分子链从卷曲状态变为伸展状态，所以架桥能力提高。例如，采用碱式氯化铝和阴离子聚丙烯酰胺搭配使用的混凝方法处理2709碱性蛋白酶发酵液，发酵液pH对阴离子聚丙烯酰胺絮凝效果的影响如下图所示。可见pH适当提高能增大滤速，这是因为聚丙烯酰胺分子链上的羧基解离程度提高，而使其达到较大的伸展程度，发挥了最佳的架桥能力。
7， 在发酵工业中，常用的固液分离设备有哪几种类型
不同性状约发酵液应选择不同的固-液分离设备。常用于发酵液的分离设备有：板框压滤机、鼓式真空过滤机、离心沉降分离机
9， 微生物细胞破碎的技术有机械方法:球磨机 ,高压匀浆器 ,X-press法 ,超声波破碎 .
非机械方法: 酶解,渗透压冲击,冻结和融化,干燥法,化学法.
10，如何选择细胞破碎的方法
细胞的数量；所需要的产物对破碎条件(温度、化学试剂、酶等)的敏感性；要达到的破碎程度及破碎所必要的速度，尽可能采用最温和的方法；具有大规模应用潜力的生化产品应选择适合于放大的破碎技术。
11，盐析的定义及其机理和优缺点
定义：在胶体溶液中加入一定量的盐溶液，会有沉淀析出的现象。
原理：在蛋白质溶液中加人中性盐后会压缩扩散双电层、降低ξ电位，即中性盐既会使蛋白质脱水，又会中和蛋白质所带的电荷，使颗粒间的相互排斥力失去，在布朗运动的互相碰撞下，蛋白质分子结合成聚集物而沉淀析出。
12，有机溶剂沉淀的原理和优缺点
优点：是某些蛋白质沉淀的浓度范围相当宽，所得产品的纯度较高，从沉淀的蛋白质中除去有机溶剂很方便，而且有机溶剂本身可部分地作为蛋白质的杀菌剂。
缺点：是需要耗用大量的溶剂，而溶剂的来源、贮存都比较因难或麻烦，并且沉淀操作需在低温下进行，使用上有一定的局限性，收率也比盐析法低。
13，等电沉淀的原理和优缺点
原理：蛋白质溶液的pH值等于其pI值时，则溶解度最小。蛋白质等电点沉淀法就是基于不同蛋白质离子，具有不同等电点的特性，用依次改变溶液pH值的办法，将杂蛋白沉淀除去，最后获得目标产物。在蛋白质疏水性比较大和结合水比较小时这种类型的沉淀更有效。
 缺点：这个技术的最大缺点是无机酸会引起较大的蛋白质不可逆变性的危险。
14，吸附法的原理、优缺点，吸附的类型
原理：吸附法是利用吸附剂与杂质、色素物质、有毒物质、产品之间分子引力的差异，从而起到分离的作用。
优点：可不用或少用有机溶剂；操作简便、安全、设备简单；生产过程中pH变化小，适用于稳定性较差的生化物质。
缺点：可不用或少用有机溶剂；操作简便、安全、设备简单；生产过程中pH变化小，适用于稳定性较差的生化物质。
类型：
物理吸附：吸附剂和吸附物通过分子力(范德华力)产生的吸附。化学吸附： 化学吸附是由于吸附剂在吸附物之间的电子转移，发生化学反应而产生的，属于库仑力 范围。
交换吸附： 吸附剂表面如为极性分子或离子所组成则它会吸引溶液中带相反电荷的离子而形成双电层。这种吸附又称为极性吸附。
15，影响吸附过程的因素有哪些
吸附剂的性质；吸附物的性质；溶液pH值的影响；温度的影响；其它组分的影响
20，膜的清洗方法有哪两种
①机械方法：加海绵球，增大流速，逆洗(对中空纤维超滤器)，脉冲流动，超声波等。
②化学方法
用起溶解作用的物质，如：酸、碱、酶(蛋白酶)，螯合剂，表面活性剂。
用起切断离子结合作用的方法，如改变离子强度、pH、电位。
起氧化作用的物质，如过氧化氢、次氯酸盐。
用起渗透作用的物质，如磷酸盐、聚磷酸盐
21，纳滤的特点
纳滤（Nanofilitration，NF）是一种新型分离技术。水处理中心于20世纪90年代率先在国内研制成功该技术。纳滤膜在其分离应用中表现出两个显著特征：一个是其截流分子量介于反渗透膜和超滤膜之间，为200～2000；另一个是纳滤膜对无机盐有一定的截流率，因为它的表面分离层由聚电介质所构成，对离子有静电相互作用。从结构上看纳滤膜大多是复合型膜，即膜的表面分离层和它的支撑层的化学组成不同。根据第一个特征，推测纳滤膜的表面分离层可能拥有1nm左右的微孔结构，故称之为“纳滤”。
纳滤技术的特点：  ① 膜结构绝大多数是多层疏松结构； ② 分离过程无任何化学反应，无需加热，无相转变，不会破坏生活活性，不会改变风味、香味。
22，反渗透是60年代发展起来的一项新的膜分离技术,是依靠反渗透膜在压力下使溶液中的溶剂与溶质进行分离的过程.反渗透的英文全名是“REVERSE OSMOSIS”,缩写为“RO”. 反渗透的原理:
首先要了解“渗透”的概念.渗透是一种物理现象.当两种含有不同盐类的水,如用一张半渗透性的薄膜分开就会发现,含盐量少的一边的水分会透过膜渗到含盐量高的水中,而所含的盐分并不渗透,这样,逐渐把两边的含盐浓度融合到均等为止.然而,要完成这一过程需要很长时间,这一过程也称为渗透压力.但如果在含盐量高的水侧,试加一个压力,其结果也可以使上述渗透停止,这时的压力称为渗透压力.如果压力再加大,可以使方向相反方向渗透,而盐分剩下.因此,反渗透除盐原理,就是在有盐分的水中(如原水),施以比自然渗透压力更大的压力,使渗透向相反方向进行,把原水中的水分子压力到膜的另一边,变成洁净的水,从而达到除去水中杂质、盐分的目的.
23，萃取的分配定律
在恒温恒压的条件下，一种物质在两种成相的溶剂（A与B，或上相与下相）的分配浓度之比是一常数，该常数称为分配系数K。

24，两水相及其优点
双水相系统是指某些高聚物之间或高聚物与无机盐之间在水中以适当的浓度溶解会形成互不相溶的两水相或多水相系统。通过溶质在相间的分配系数的差异而进行萃取的方法即为双水相萃取
双水相萃取的优点1）易于放大（2）双水相系统之间的传质过程和平衡过程快速 ,因此能耗较小 , 可以实现快速分离；3）易于进行连续化操作；4）相分离过程温和 ,生化分子如酶不易受到破坏；（5）选择性高、收率高；（6）操作条件温和。
25，超临界流体萃取的原理，其典型流程包括哪三种类型
临界温度(Tc) ：当气体的温度高于某一数值时，任何压缩都不能使它变为液体。
临界压力（Pc）：在临界温度下，气体能被液化的最低压力。
超临界状态：当物质所处的温度高于临界温度、压力大于临界压力时 
超临界流体：在临界点(指在临界温度Tc和临界压力Pc状态)附近，可以观察到一些有意义的现象：压力和温度的微小变化都会引起气体密度的很大变化。随着向超临界气体加压，气体密度增大达到液态性质，这种状态的流体称为超临界流体。其性质介于气体和液体之间。
超临界萃取：使用超临界流体作为溶剂的萃取方法，就称为超临界萃取。
超临界流体萃取的流程可分为：等温变压法；等压变温法；吸附法。                   
固定化细胞的缺点：仅能利用胞内酶；细胞膜、细胞壁和载体都存在着扩散限制作用；载体形成的孔隙大小影响高分子底物的通透性；可能有副反应。                                       
固定化细胞的分类1），按细胞类型分为三类：微生物，动物，植物      2），按生理状态分为两大类  死细胞：完整细胞、细胞碎片、细胞器。适用于一种酶催化的反应。活细胞：增殖细胞、静止细胞、饥饿细胞。适用于多酶反应，特别是需要辅酶的反应。                               
3，固定化细胞反应器的优点，主要有哪些类型                                   
答：在固定化细胞反应器中采用高稀释率有以下优点：生产强度、转化率高；与衡化器相比，固定化细胞反应器具有更好的稳定性；节省投资和能耗。                 
固定化细胞反应器的类型细胞再循环系统（Cell recycle systems ）填充床反应器（Fixed bed reactors ）流化床反应器（Fluidized bed reactors ）絮凝细胞系统（Flocculated cell systems ）
1， 基因工程
基因工程是指在基因水平上，采用与工程设计十分类似的方法，根据人们的意愿，主要是在体外进行基因切割、拼接和重新组合，再转入生物体内，产生出人们所期望的产物，或创造出具有新的遗传特征的生物类型，并能使之稳定地遗传给后代。
基因工程的核心技术是DNA的重组技术
基因工程一般分为4个步骤：取得符合人们要求的DNA片段，这种DNA片段被称为“目的基因”；将目的基因与质粒或病毒DNA连接成重组DNA；把重组DNA引人某种细胞；把目的基因能表达的受体细胞挑选
2， 如何获得一个工程菌
确定目的产物。找出产该产物的细胞。将细胞破碎后提纯出全部信使RNA。这些信使中包含了该细胞内表达的所有蛋白质的合成信息。利用基因扩增技术（PCR），找出所需的目的基因。将目的基因连接到设计好的质粒载体，形成了重组DNA分子。将重组后DNA分子引入到受体细胞内，然后选择合适的培养条件使细胞繁殖。根据选择性标记，从菌落中筛选出目的基因的重组(工程)菌。
3， 一个可用于工业化生产的工程菌必须符合哪些要求
发酵产品是高浓度、高转化率和高产率的，同时是分泌型菌株。菌株能利用常用的碳源，并可进行连续发酵。菌株不是致病株，也不产内毒素。代谢控制容易进行。能进行适当的DNA重组，并且稳定，重组的DNA不易脱落。
4， 物理密封、生物学密封
物理密封是将重组菌封闭于设备内，以防止传染给实验人员和向外界扩散。实验规模在20L以下时，物理密封由密封设施、实验室设计和实验注意事项组成。密封程度分为P1、P2、P3和P4级，数字越大，密封水平越高。
生物学密封要求用只有在特殊培养条件下才能生存的宿主，同时用不能转移至其它活细胞的载体，通过这样组合的宿主载体系统，可以防止重组菌向外扩散。按密封程度分B1和B2级，B2级的密封要求最严格。   
6， 在工程菌中，质粒的不稳定性有哪两种类型
分离性不稳定：这是由于在细胞分裂过程中质粒缺失分配到子细胞中而导致整个质粒丢失。
结构性不稳定：这是由于重组质粒DNA发生缺失、插入或重排引起的质粒结构变化。
7， 影响工程菌中质粒的稳定性的因素有哪些，如何提高工程菌中质粒的稳定性
与质粒稳定有关的基因及质粒结构自身对其稳定性的影响；宿主对质粒稳定的影响；质粒拷贝数；重组质粒的表达对质粒稳定性的影响
9， 在工程菌体的培养过程中，必须要工程菌的外漏，从工程角度分析，在培养过程中，有哪些方面可能会造成工程菌的外漏
排气，机械密封，接种，取样，培养后的灭菌(通入湿热蒸气)，排液(输至下一工序)。
2， 常用的动物细胞培养方法有哪些、各自的优点
悬浮培养 （批量法、半连续法、连续法）
可连续收集部分细胞进行移植继代培养，传代时无需消化分散，免遭酶类、EDTA及机械损害。
细胞收率高，并可连续测定细胞浓度，还有可能实现大规模直接克隆培养
固定化培养（吸附法、包埋法 ）
细胞可维持在较小体积培养液中生长； 细胞损伤程度低； 易于更换培养液； 细胞和培养液易于分离； 培养液中产物浓度高，简化了产品分离纯化操作。
微载体（Microcarrier）培养法 
将动物细胞吸附于微载体表面，在培养液中进行悬浮培养，使细胞在微载体表面长成单层的培养方法称为微载体培养法或微珠培养法，兼具单层培养和悬浮培养的优势，且是均相培养。细胞所处环境均一，放大容易。培养操作可系统化、自动化，障低了污染发生的机会。
3， 动物细胞悬浮培养法
动物细胞在培养液中呈悬浮状态生长繁殖的培养方法谓之悬浮培养法。其培养方式有批量法，半连续法，连续法。适用于培养确立细胞株、杂交瘤细胞、肿瘤细胞、血液细胞及淋巴组织细胞，用于大量生产疫苗、α-干扰素、白介素等药品。此法不适于包括二倍体细胞在内正常组织细胞的培养。
细胞悬浮培养法的优点
可连续收集部分细胞进行移植继代培养，传代时无需消化分散，免遭酶类、EDTA及机械损害。
细胞收率高，并可连续测定细胞浓度，还有可能实现大规模直接克隆培养
注意事项
培养过程中，为确保细胞呈单颗粒均匀悬浮状态，需采用搅拌或气升式反应器，以较低搅拌速度及一定速度通入含5％CO2的无菌空气，保持细胞悬浮态并维持培养液溶解氧。此外不同细胞悬浮条件亦异，为使细胞不致凝集、成团或沉淀，在配制培养基的基础盐溶液中不加钙和镁离子。间歇或连续更换部分培养液，可维持pH值，若使用HEPES缓冲盐溶液时尚可不必连续通入含5％CO2空气。
4， 动物细胞培养的条件控制有何特殊要求
动物细胞生长缓慢，又具有锚地依赖性，培养时为防止污染，除反应器密封性能良好外，尚需添加抗生素，培养过程还要求培养器、管道及接头处所用材质不可释放出对细胞有毒害的物质。在分批培养时，随着细胞生长，营养消耗，必然产生乳酸等代谢物的积累，引起细胞衰退死亡，需更换培养液或移植继代培养。动物细胞培养过程亦应控制一定的环境条件，如培养温度、溶解氧、pH、罐压及搅拌速度等。 动物细胞对环境变化适应能力较微生物细胞小得多，故条件控制精密度要求更高。其中特别重要的是溶解氧和pH的控制。
5， 培养植物细胞的培养基的主要组成，选择培养基的主要原则
培养基的成分由无机盐类、碳源、维生素、植物生长激素、有机氮源、有机酸和一些复合物质组成。
选择培养基的基本原则：需要根据不同培养对象、培养目的及培养条件探索适宜培养基。 选择的培养基在培养过程使细胞总体积倍增时间1天左右为宜。 
6， 植物细胞大规模培养的方式有哪些
悬浮培养法 ；分批培养法；半连续培养法；连续培养法 ；固定化培养法
7， 影响植物细胞培养的因素
细胞种质影响 外界因素影响 光照影响；温度影响 ；培养基成分的影响 ；搅拌方式与通气的影响 

枯草芽孢杆菌Bacillius subtilis,酿酒酵母Sacchromyces cerevisia和黑曲霉Aspergillus niger写出名称并说出主要的发酵产品。
黑曲霉可以用来生产蛋白酶等酶制剂、酿酒用糖化酶、柠檬酸等有机酸等产品
发酵强度以及提高方法原理
固液分离方式特点
发酵工程的定义，试说明发酵工程在资源、能源、以及环境问题中的重要作用
生物技术如何发挥其在能源可持续发展的作用
论述"二十一世纪是工业生物技术的世纪"
以任意发酵产品为例说明清洁生产实现过程
以具体发酵产物为例，阐述所需要的微生物以及工艺条件
试举例说明一个典型厌氧发酵产品生产所用微生物及其发酵过程的关键共性技术