一 是非题 15分

1 对

2 对

3 错

4 错

5 错

6 对

7 错

8 对

9 对

10 错

11 错

12 错

13 错

14 错

15 错

16对

二 填空题 30分

1 a,b 烘箱热空气灭菌法，火焰灼烧法。

2 蛋白胨，牛肉膏，硫酸胺，硝酸钠，豆饼粉。

3 球状、杆状、螺旋状。

4 N乙酰胞壁酸，N乙酰葡萄糖胺，短肽。

5 吡哆二磷酸，DPA。

6 林奈氏双名法，属名，种名。

7 细胞质膜，生物氧化，核分裂，横隔壁，胞外酶分泌。

8 鞭毛蛋白，运动。

9 多糖，肽等，负染。

10 几丁质等。甘露聚糖，葡聚糖。

11 固体、液体和半固体。

12 无细胞壁。

13 细胞骨架和能源。

14 细菌和霉菌，细菌，基内菌丝，气生菌丝，孢子丝。

15 子囊孢子，接合孢子，卵孢子。质配，核配，减数分裂，单倍体。

16 青霉属

17 5 X109

18 RNA, cDNA, mRNA。

19 大肠杆菌，呼肠孤病毒或假单胞菌的? 6病毒。

20. 枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，北京棒状杆菌，产氨短杆菌，德氏乳酸杆菌，丙酮丁醇梭状芽孢杆菌。

21 微好氧菌，好氧菌，兼性厌氧菌，耐氧菌，厌氧菌。

三 问答题

在营养物浓度很低的情况下，营养物的浓度影响细菌的生长速率。随着营养物浓度的逐步增高，营养物浓度不影响生长速率，但影响最终的菌体产量。如果进一步提高营养物浓度，营养物浓度不影响生长速率，不影响最终菌体生成量。

细胞大小、形态；繁殖体在胞内的位置，形态及数量；鞭毛线毛的位置和数量；内含物的种类；细胞器的结构、数量；菌落形状、大小、色泽、硬度、光滑度等；菌丝的有无分隔；分生孢子梗，孢子囊等形态结构；病毒的噬菌斑、包含体，头部、尾部结构；

在实验室中常用：

试管液体培养：此法的通气效果一般较差。仅适用于进行微生物的各种生理生化试验。

摇瓶培养 将装有液体培养基的三角瓶（摇瓶），上盖8-12层纱布或用疏松的棉塞塞住以阻止空气中杂菌或杂质进入瓶内，而空气可以透过阻隔供菌呼吸之用。将摇瓶放在摇瓶机（摇床）上以一定速度保温振荡培养。摇瓶培养不仅操作简便，而且可以将许多摇瓶（在大摇床上可多达上百个）同时在相同的温度和振荡速度等条件下进行培养试验。摇瓶培养在实验室里被广泛用于微生物的生理生化试验、发酵和菌种筛选等，也常在发酵生产中用于种子培养。 (3) 台式发酵罐 实验室用的发酵罐体积一般为几升到几十升。一般都有多种自动控制和记录装置。如配置有pH、溶解氧、温度和泡沫检测电极，有加热或冷却装置，有补料、消泡和pH调节用的酸或碱储罐及其自动传送装置。因为它的结构与生产用的大型发酵罐接近，所以，它是实验室模拟生产实践的试验工具。

在生产中常用：

浅盘培养(shallow pan culture) 容器中盛装浅层液体静止培养，没有通气搅拌设备，全靠液体表面与空气接触进行氧气交换。这是最为原始的液体培养形式。

发酵罐深层培养 液体深层培养的主体设备是发酵罐。发酵罐可以为微生物提供丰富而均匀的营养，良好的通气搅拌，适宜的温度和酸碱度，并能防止杂菌污染。为此，它配备有培养基配制系统、蒸汽灭菌系统、空气压缩过滤系统和补料系统。生产效率较高，易于控制，产品质量稳定，因而在发酵工业中被广泛应用。但是，深层培养耗费的动力较多，设备较为复杂，需要较大的投资。

青霉素是肽聚糖单 体五肽末端的D-丙氨酰-D-丙氨酸的结构类似物，它们相互竞争转肽酶的活性中心。当转肽酶与青霉素结合后，因前后两个肽聚糖单体间的肽桥无法交联，因而只能合成缺乏正常机械强度的缺损肽聚糖，从而形成细胞壁缺损的细胞。因为它是抑制肽聚糖的合成，因此对生长旺盛的微生物具有明显的抑制作用，而对生长休止状态的细胞，则无作用；溶菌酶广泛存在于卵清、人的泪液和鼻涕、部分细菌和噬菌体中，它能有效地水解细菌的肽聚糖，其作用部位就是N-乙酰胞壁酸的1位碳和N-乙酰葡萄糖胺的4位碳之间的Alpha-1,4糖苷键。它对生长期和休止期的细胞均有作用。

a. 液体稀释法 对未知菌样作连续的10倍系列稀释。根据估计数，从最适宜的3个连续的10倍稀释液中各取5ml试样，接种到3组共15支装有培养液的试管中（每管接入1ml）。经培养后，记录每个稀释度出现生长的试管数，然后查MPN(most probable number )表，再根据样品的稀释倍数就可计算出其中活菌含量。

b. 平皿菌落计数法 将发酵液稀释后涂布在固体培养基表面，也可将熔化后冷却至45-50℃的固体培养基与一定稀释度的菌悬液混合，凝固后培养适当时间，测定菌落形成单位的数目。不同菌种的菌落大小不同，一般控制在9厘米培养皿中生长50-500个菌落为佳。该法可以反映样品中活菌的数量。较适合于细菌和酵母菌，不适于霉菌。有人将培养基放在固定于载玻片上的小环中，将细胞接种到这微型平板上，经短时间培养后，将其移到显微镜下观测菌落数目。与以上平皿计数法相比，它能更快速获得结果。

c.细胞组分ATP定量法 ATP在一定的微生物细胞中含量很稳定，一般是10-6M数量级。典型细菌细胞的ATP含量为每克细胞干重含有1毫克ATP。因为细胞死亡几分钟内，ATP就会被水解，所以，以ATP为指标，可以快速、灵敏地反映活菌体数量。ATP测定可以利用萤光素酶催化的生物发光反应。

9 恒化培养与恒浊培养的比较

装置
控制对象
生长限制因子
培养液流速
生长速度
产物
应用范围

恒化器
培养液流速
有
恒定
低于最高生长速度
不同生长速度的菌体
实验室为主

恒浊器
菌液密度
无
不恒定
最高生长速度
大量菌体或与菌体生长平行的代谢产物
生产为主