细胞工程考研复习最终整理精编版(5)

本站小编 免费考研网/2016-08-16


植物胚胎培养:对植物的胚及胚器官进行人工离体培养,使其发育成幼苗的技术。
二十一:人工种子的有点:1.便于运输和贮藏。
                2.人工胚乳可以根据不同植物的要求配制,通过假如植物激素。有益微生物或抗病、抗虫成分,使人工种子优越于天然种子。
                3.可以固定杂种优势,加速良种繁育。
                4.可以作为植物基因工程和遗传工程的载体。
                5.可以保存珍贵稀有植物品种。
                6.利于快速繁殖,生产效率高
二十二:植物脱毒方法:
1.物理方法:(1)高温处理:又称热疗法。原理是一些病毒对热不稳定,在高于常温钝化失活,繁殖力下降,失去侵染能力,而植物基本不受伤害。包括:温汤处理和热风处理。
           (2)低温处理:又称冷疗法。原来是低温使病毒活力下降。
2.化学方法:利用嘌呤和嘧啶类似物、氨基酸、抗生素等化学药品处理患病植物可以抑制植物体内病毒的复制。
3.生物方法:(1)茎尖培养:有效的植物脱毒方法,周期短、效率高。
           (2)微体嫁接法:将极小的茎尖嫁接到不带病毒的种子实生苗钻木上得到无毒苗。适用于根尖培养脱毒生根困难、不能形成完整植株的植物。
           (3)愈伤组织诱导脱毒:植物器官或组织经诱导可产生愈伤组织,再分化培养长成小植株。有无病毒细胞产生的愈伤组织可以获得无病毒苗。
           (4)珠心胚培养法:珠心胚由珠心组织细胞分化形成,具有与母体相同的遗传特性。通过珠心胚培养可以获得无毒再生植株,同时保存了母株的遗传特性。缺点是苗期长,变异率高。
           (5)花药培养脱毒:花药培养能产生无病毒植株。




二十三:脱毒植物鉴定:
直接检测法:直接观察植株茎、叶等器官有无病毒引起的的症状。
指示植物法:采用对某种病毒反应敏感、症状明显的植物来检测病毒,一旦感染病毒就会在叶片或全株上表现出特有的病斑。(1)摩擦接种发和嫁接法。
电镜法:超薄切片后采用电子显微镜观察样品材料有无病毒存在,还可以鉴定病毒颗粒大小、形状和结构。
抗血清检测法:病毒携带抗原。注射进动物体内会在血清中产生抗体得到抗血清。可以根据已知病毒的抗血清与样品是否发生血清反应来鉴定是否村子病毒。
分子检测技术:利用已知病毒的核苷酸序列设计引物,采用PCR技术体外扩增病毒的DNA片段,或通过探针杂交等分子技术检测。
二十四:细胞融合方法:
1.生物法:病毒诱导细胞融合主要是由于病毒会与宿主细胞膜直接融合,同时进入两个细胞就会打破两个细胞膜的隔阂,引发细胞质的交流,进而达到细胞融合的目的。病毒诱导细胞融合需要在适当的PH下,有足够两的Ca2+存在。步骤:(1)使足够量的病毒颗粒附着在细胞膜上起搭桥作用,使细胞聚集在一起。(2)通过病毒与原生质体或细胞膜的作用是两个细胞膜见相互融合,胞质相互渗透。黏结部位质膜被破坏,不同细胞间形成通道,细胞质流通并融合,病毒也随之进入细胞质。(3)两个细胞合并成融合细胞,再生细胞壁。(4)筛选合细胞。
2.化学法:采用化学诱导剂促使细胞融合的方法。(1)NaNO3诱导融合(2)高PH的高浓度Ca2+诱导融合(3)聚乙二醇(PEG)诱导融合。
3.物理法:最常用的是点融合诱导法。利用电场来诱导细胞彼此连接成串,再施加瞬间强脉冲促使质膜发生可逆性电击穿,促进细胞融合的技术。
二十五:花药和花粉培养获得单倍体:
1.步骤:(1)分离:把花药放在玻璃容器中,加入一定量适当浓度的蔗糖溶液或直接加入适量液体的培养基,用注射器内径轻轻挤压花药将花粉挤出,或用磁力搅拌器把花药搅裂使花粉散出来。
(2)过筛:把花药残渣和花粉混合液经一定孔径的过滤网过滤。将带有花粉的滤液注入离心管。
(3)清洗:用吸管将上清液弃除,重新加入蔗糖溶液或培养基再离心,弃去上清液,重复2、3次,最后一次需用培养花粉的液体培养基进行。最后,取出上清液后加入一定量液体培养基,使花粉的密度达到所需要求。
2.植株再生:花药和花粉接种到培养基后,在适宜条件下,经过一段时间培养,小孢子发生脱分化,改变原来发育途径,通过器官发生型或胚状体发生型再生成单倍体植株。
3.单倍体筛选:由花药和花粉培养获得的植株并不都是期望的单倍体,包括单倍体、二倍体、多倍体和非整倍体,单倍体所占比例不高,所以要对获得的花粉和花药植株进行倍性鉴定筛选出单倍体植株。
二十六:植物离体受精在新品种培育中的意义:对受精的生理生化机制及早期胚胎发育的研究具有理论意义。可以越过花粉—柱头识别障碍,克服远缘杂交不亲和或自交不亲和行,并在转基因植物培育方面具有独特优势。利用离体的胚珠授粉可以顺利完成受精,培养人工杂种合子可以帮助解决杂种细胞不分裂、杂种愈伤组织不分化、后代长期不稳定等诸多问题,用合子作为转基因的受体在转化率和后代中外源基因的遗传稳定性方面有优势。



二十七:细胞株筛选一般步骤:
(1)愈伤
组织的诱导与培养:选用植物的目标化合物高产部位作为外植体诱导愈伤组织,其形成后,进行继代培养。
(2)单细胞分离:选取生长快速而疏松的愈伤组织,通过固体培养基继代养,挑选生长快速的细胞。

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