细胞工程考研复习最终整理精编版(6)

本站小编 免费考研网/2016-08-16


(3)细胞无性系的分离:转移到液体培养基中进行悬浮培养,从中选择分散性好、生长速度快的细胞。
(4)细胞株筛选:检测目标产物含量,选择目标产物含量高的细胞株。
(5)性能评价:进行较大规模培养,考察细胞生长与目标产物合成的稳定性。
(6)细胞株获得:获得适合工业化生产的细胞株,保种。
二十八:单克隆抗体制备:动物免疫、细胞融合、选择杂交细胞、检测抗体、杂交瘤细胞的克隆化、单克隆抗体的大量产生几个步骤。
免疫小鼠注射特定的抗原蛋白                培养骨髓溜细胞
           ↓                                    ↓
       B淋巴细胞                             骨髓瘤细胞
             ↘                                ↙
                           融合
                             ↓
                          杂交细胞
                             ↓
                         筛选杂交细胞(抗体检验)
                             ↓
                       克隆能产生抗体的阳性细胞

在克隆阳性细胞
                 ↙                               ↘
         注射小鼠                               体外培养
            ↓                                     ↓
        单克隆抗体                              单克隆抗体
二十九:利用转基因细胞生产基因工程产品步骤:(1)目的基因的获得:从供体细胞中分离出基因组DNA,使用限制性内切酶按照DNA上特定的酶切位点将DNA分子的双链交错地切断获得目的基因片段。(2)DNA重组:将载体分子采用与获得目的基因形同的限制性内切酶进行剪切,利用DNA连接酶把目的DNA连接到载体分子,获得DNA重组分子。(3)重组DNA引入受体细胞:借助于基因转移技术将DNA重组分子导入受体细胞,并使其扩增或整合到受体细胞的基因组中。(4)筛选鉴定:筛选和鉴定转化细胞,获得外源基因高效稳定表达的基因工程菌或细胞。(5)产品生产
三十:转基因动物乳腺生物反应器生产药用蛋白优势:(1)动物乳腺组织有能力对表达的蛋白进行大规模复杂而专一的翻译后修饰,可以正确折叠为有功能的构象,生产出的药用蛋白与天然蛋白质的活性一致。(2)动物乳腺不仅能大量持续地表达蛋白质,可维持所表达蛋白质的稳定性,而且可以通过诱导系统调控表达。(3)比细胞培养法产生药用蛋白成本低,安全性大大加强。(4)药物分离纯化工艺简便。,可通过家畜繁殖技术大量增加后代数量,扩大再生产规模。

三十一:植物转基因技术转化方法:(1)载体介导法:将目的基因插入到农杆菌的质粒或病毒的DNA分子上,随着质粒或病毒DNA的转移进入受体。(2)基因直接导入法:通过物理或化学方法直接将外源目的基因导入植物细胞。物理方法:点击法、基因枪法、超声法、显微注射法等;化学方法:PEG法、脂质法。(3)种质系统法:在植物授粉后,将外源DNA注入子房的胎座位置,使DNA沿花粉管通道进入胚囊与受精卵或胚细胞接触。(4)病毒感染法:病毒可以感染植物组织,不仅双子叶和单子叶限制,因此病毒DNA可以作为载体转化植物细胞。

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