微生物学复习题考研资料(8)
本站小编 免费考研网/2016-05-13
准性生殖:是指不经过减数分裂就能导致基因重组的生殖过程。在该过程中染色体的交换和染色体的减少不像有性生殖那样有规律,而且也不是协调的。
原生质体融合:是将遗传性状不同的两种菌(包括种间、种内及属间)融合为一个新细胞的技术。主要包括原生质体的制备、原生质体的融合、原生质体的再生和融合子选择等步骤。
突变:是生物的基本遗传过程。广义上,突变是指染色体数量、结构及组成等遗传物质发生多种变化的现象,包括染色体畸变和基因突变等,它可导致后代形态、功能的改变。
基因突变:一个基因内部遗传结构或DNA序列的任何改变,包括一对或少数几对碱基对确实、插入或置换,而导致的遗传变化称为基因突变,其发生变化的范围很小,所以又称点突变或狭义的突变。
利用基因自发突变从自然界中筛选微生物菌株的方法:
在生产过程中,不经过人工处理,利用菌种的自发突变而进行菌种筛选的过程叫自然选育。
自发突变(spontaneous mutation),也称自然突变,指某些微生物在没有人工参与下所发生的突变。
菌种的自发突变往往存在两种可能性:一种是菌种衰退,生产性能下降;另一种是代谢更加旺盛,生产性能提高。利用自发突变出现的菌种性状的变化,可选育出优良菌种。例如,在谷氨酸发酵过程中,从被噬菌体污染的发酵液中分离出了抗噬菌体的菌种。又如,在抗生素发酵生产中,从某一批次高产的发酵液取样进行分离,往往能够得到较稳定的高产菌株。
自然选育的一般程序:
制备单孢子(单细胞)悬液---- 适当稀释----在固体平板上分离-----
挑取部分单菌落进行生产能力测定-----经反复筛选以确定生产能力更高的菌株替代原来的菌株。
自然选育简单易行,可以达到纯化菌种、防止菌种衰退、稳定生产、提高产量等目的。自然选育的最大缺点是效率低、进展慢,很难使生产水平大幅度提高。
(令)1)、从生产中筛选
利用酒精工厂糖化酶生产菌筛选到糖化能力强、培养条件叫粗放的白色孢子变种,“上酒白种”;
2)、从自然界中筛选菌种
步骤:调查研究→设计方案→采样→增殖培养→分离→筛选(初筛、复筛)→鉴定(生产性能实验、毒性实验)
方法:
1)、采样:土壤、水分、温度、通风、酸碱度等,样品装入灭菌容器;
2)、增殖培养:常用的增殖方法:控制营养成分,控制培养基的酸碱度,控制培养基的问的和热处理,添加抑制剂。
3)、分离:稀释分离,画线分离,组织分离。
4)、筛选:
初筛:平板快速检验法,
复筛:确定工艺条件,培养基组成,通风培养问度等
5)、鉴定菌种,毒性试验,菌种鉴定。
诱变育种:是指利用各种诱变剂处理微生物细胞,提高基因的随机突变频率,通过一定的筛选方法(或特定的筛子)获得所需要的高产优质菌株
诱变育种基本工作原则是什么:
1、出发菌株的挑选:出发菌株是指用于育种的起始菌株。选择时要注意:具有有利性状及对诱变剂的敏感性。
2、敏感期和合适对象的选择:敏感期,如菌体的对数期,孢子或芽孢的萌发前期;合适对象,如孢子、芽孢,因其多为单核状态。处理前制成单孢子或单细胞悬液,其目的是:能均匀接触诱变剂,并能减少诱变后性状的分离及退化现象。
3、诱变剂的选择:一般的原则是使用的方便性和有效性。
4、诱变计量的选择:在大多数情况下,用高剂量诱变剂处理获得的负突变率高,在偏低的计量中正突变率反而较高。
5、初筛:初筛及粗筛。筛选量大犹如大海捞针,故采用的方法需简便、快速。最常用的有透明圈法、抑菌圈法和颜色变化等方法。
6、复篩:复篩即精细筛选。通常选用液体摇瓶培养方法,直接检测所需的产物量。
通过诱变筛选营养缺陷型的方法与步骤:
在诱变后通常通过中间培养、淘汰野生型、营养缺陷型检出、营养缺陷型鉴定等步骤,最终筛选出营养缺陷型
1) 中间培养 对数生长中期,单核细胞常出现双核现象,多核细胞的核也成倍增加,人工诱变对数期的细胞时,突变通常发生在一个核上,故其变异或非变异的细胞必须经过一代或几代繁殖才能分离,这种纯种变异细胞出现的推迟现象称为分离延迟现象,这个培养过程称为中间培养。在细菌中用完全培养基或补充培养基培养过夜即可
2) 淘汰野生型 即浓缩缺陷型。中间培养后的细胞中除营养缺陷型菌株外仍含有大量野生型菌株,为便于筛选,须将野生型细胞淘汰以浓缩营养缺陷型细胞,常用抗生素法和过滤法。前者的基本原理是野生型细胞能在基本培养基上生长繁殖,可选用某种抗生素将生长状态的细胞杀死,而留下不能生长的缺陷型细胞。过滤法是使能在基本培养基上生长形成菌丝体的野生型留在滤膜上,不能生长的营养缺陷型细胞则能透过滤膜。由此可见,缺陷型能否被浓缩,关键是细胞在基本培养基中能否生长。未来准确地表现性状,必须使细胞在浓缩前耗尽体内或体表的营养,故需用基本培养基洗涤,然后再用基本培养基加抗生素培养。
3) 营养缺陷型检出 浓缩后得到的营养缺陷型比例虽加大,但不是每株都是营养缺陷型,还需进一步分离,常用方法有:
点种法: 把浓缩的菌液(细胞或孢子)在完全培养基上进行分离培养,然后将平板上出现的菌落逐个点钟到基本培养基和完全培养基上,经过一定时间培养后,凡是在基本培养基上不能生长为在完全培养基上能生长的菌落,经重新复证后仍然如此,则这样的菌落便是营养缺陷型。
夹层检出法: 在培养皿底层倒入一次呢个基本培养基,待凝后,在其上倒入一层稀释菌液与基本培养基的混合物,凝后在倒入一层基本培养基,培养后长出的菌落为野生型,其上再加上一层完全培养基,经过培养后新出现的菌落多数是缺陷型。这种方法一般适用于细菌。
限量补充培养基检出法:将经过浓缩的菌液接种在含有微量蛋白胨的基本培养基上培养,野生型迅速生长成较大的菌落,而营养缺陷型生长较慢,故长成小菌落检出。
影印法:将已灭菌的丝绒布,抱在直径小于培养皿的小圆柱体上,这样便制成了一个印章,它可使菌落位置不变地从一个培养皿移至另一个培养皿。具体操作方法是:把印章放在已长出菌落的平皿(完全培养基)上轻轻压一下(注意不要沾上培养基),然后轻轻地分别印在基本培养基和完全培养基上,培养后,在完全培养基上生长,而在基本培养基上不生长的菌落便是营养缺陷型。
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