（3）甲硫氨酸以SAM的形式供甲基后，S-腺苷同型半胱氨酸进一步转变成同型半胱氨酸，同型半胱氨酸可接受N5-CH3-FH4提供的甲基再重新形成甲硫氨酸，形成一个循环过程。
                           什么是核酸的核酸的变性、复性和杂交：


（一） 变性
在一定理化因素作用下，核酸双螺旋等空间结构中碱基之间的氢键断裂，变成单链的现象称为变性（denaturation）。引起核酸变性的常见理化因素有 加热、酸、碱、尿素和甲酰胺等。在变性过程中，核酸的空间构象被破坏，理化性质发生改变。由于双螺旋分子内部的碱基暴露，其A260值会大大增加。 A260值的增加与解链程度有一定比例关系，这种关系称为增色效应（hyperchromic effect）。如果缓慢加热DNA溶液，并在不同温度测定其A260值，可得到 “S”形DNA熔化曲线（melting curve）。从DNA熔化曲线可见DNA变性作用是在一个相当窄的温度内完成的。

当A260值开始上升前DNA是双螺旋结构，在上升区域分子中的部分碱基对开始断裂，其数值随温度的升高而增加，在上部平坦的初始部分尚有少量碱基对使两 条链还结合在一起，这种状态一直维持到临界温度，此时DNA分子最后一个碱基对断开，两条互补链彻底分离。通常把加热变性时DNA溶液A260升高达到最 大值一半时的温度称为该DNA的熔解温度（melting temperature Tm），Tm是研究核酸变性很有用的参数。Tm一般在85～95℃之间，Tm值与DNA分子中G C含量成正比。


（二） 复性
变性DNA在适当条件下，可使两条分开的单链重新形成双螺旋DNA的过程称为复性（renaturation）。当热变性的DNA经缓慢冷却后复性称为退 火（annealing）。DNA复性是非常复杂的过程，影响DNA复性速度的因素很多：DNA浓度高，复性快；DNA分子大复性慢；高温会使DNA变 性，而温度过低可使误配对不能分离等等。最佳的复性温度为Tm减去25℃，一般在60℃左右。离子强度一般在0.4mol/L以上。


（三） 杂交
具有互补序列的不同来源的单链核酸分子，按碱基配对原则结合在一起称为杂交（hybridization）。杂交可发生在DNA-DNA、RNA-RNA 和DNA-RNA之间。杂交是分子生物学研究中常用的技术之一，利用它可以分析基因组织的结构，定位和基因表达等，常用的杂交方法有Southern印迹 法，Northern印迹法和原位杂交（insitu hybridization）等。

核酸的变性和复性变性(denaturation)和复性(renaturation) 是双链核酸分子的二个重要物理特性。也是核酸研究中经常引用的术语。双链DNA,RNA双链区,DNA: RNA杂种双链(hybrid duplex)以及其它异源双链核酸分子(heteroduplex) 都具有此性质。

蛋白质糖基化修饰主要有N-连接的糖基化和O-连接的糖基化两种类型。前者寡糖基直接连接的氨基酸残基是天冬酰胺（Asn），后者主要是丝氨酸（Ser）和苏氨酸（Thr），此外也可能是羟脯氨酸和羟赖氨酸（如胶原蛋白）。
 苏氨酸，丝氨酸、酪氨酸。因为他们有羟基基团，可以和磷酸基团脱水生成磷酸酯
lys，arg能被甲基化，
就是将氨基和乙酸酐进行反应，得到酰胺类物质，只要N上有H，基本上都可以进行乙酰化
氨基的烃基化：氨基酸与RX作用则烃基化而成N-烃基衍氨基酸

蛋白质检测方法汇总
(2010-11-17 19:06:09)
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杂谈

蛋白质检测方法汇总
化学测量 2008-11-10 17:42:19 阅读1281 评论1  字号：大中小订阅

蛋白质检测方法汇总
本实验的目的是学会各种蛋白质含量的测定方法。
了解各种测定方法的基本原理和优缺点。
 蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法（Bradford法）。其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10～20倍，比Biuret法灵敏100倍以上。定氮法虽然比较复杂，但较准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。
 值得注意的是，这后四种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，因为一种蛋白质溶液用这四种方法测定，有可能得出四种不同的结果。每种测定法都不是完美无缺的，都有其优缺点。
在选择方法时应考虑：
①实验对测定所要求的灵敏度和精确度；
②蛋白质的性质；
③溶液中存在的干扰物质；
④测定所要花费的时间。
考马斯亮蓝法（Bradford法），由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。
一、微量凯氏（Kjeldahl）定氮法
样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下：
 CH2COOH
 |     + 3H2SO4--------- 2CO2 + 3SO2 +4H2O +NH3  (1)
 NH2
  2NH3 + H2SO4 -------- ---(NH4)2SO4        (2)
 (NH4)2SO4 + 2NaOH ----------- 2H2O +Na2SO4 + 2NH3    (3)
  反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。
为了加速消化，可以加入CuSO4作催化剂，K2SO4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。
  五种蛋白质测定方法比较如下：
方法   灵敏度   时间   原理   干扰物质   说明