2006年硕士学研究生入学考试试题及答案
一，选择
1 Sacchromyces cerevisiae 的无性繁殖方式是:                         A.裂殖 B芽殖 C假菌丝繁殖 D子囊包子繁殖
2 菌种的分离，培养，接种和染色等研究微生物的技术的发明者是      A巴斯德B科赫C列文虎克D别依林克
3真核微生物中                                                A  TCA环反应在细胞中进行，EMP途径在线粒体内进行 B  TCA环反应在线粒体中进行，EMP途径在细胞内进行 C  TCA环反应及EMP途径在细胞中进行 D  TCA环反应及EMP途径在线粒体内进行 
4．下列霉菌中，哪一种属于多核单细胞结构                        A 红曲霉 B米曲霉 C产黄青霉 D黑根霉
5 下列微生物命名正确的是                                      A  Candida utilis     B escherich coli C bacillus D Cerevisiae sacchromyces
6.由菌株A＋B－和A－B＋形成的异核体菌落上所形成的分生孢子，一般情况下在（）培养基上不能萌                                            A MM   B MM+A   C MM+B   D MM+A+B
7 组织分离法是纯种分离方法之一，适用于                         A 细菌 B 放线菌C 高等真菌D酵母菌
8菌苔是微生物在（）上的培养特征                                A 固体平板B固体斜面 C液体斜面D明胶穿刺
9 下列孢子中属于真菌无性孢子的有（）二倍体有性孢子的有（）单倍体有性孢子的有（）属于真菌休眠体的有（）
A节孢子B接合孢子C子囊孢子D厚垣孢子E卵孢子F担孢子G分生孢子H孢子囊孢子
参考答案：B，B，B，D，AD，A，C，A，（ADGH）（BE）（CF）（D） 二，名解
1芽孢：指某些细菌的生长发育后期，在细胞内形成的圆形、椭圆、壁厚、抗逆性强的休眠构造，不具有繁殖能力。
2革兰氏染色：一种重要的鉴别染色法，先用结晶紫初染、碘液媒染、 95％乙醇脱色、番红复染。革兰氏阳性菌被染成紫色，革兰氏阴性菌被染成红色。
3生长因子：需要量很少，但是调节微生物正常代谢所必须的、又不能由简单的碳氮源自行合成的有机物，如：维生素、氨基酸、碱基等。
4类囊体：蓝细菌或植物细胞内的单膜囊状细胞器，在类囊体膜上含有大量的光合色素，可以进行光合作用，提供能量。
5诱导抑制剂法：筛选组成型突变型微生物，当诱导物和诱导抑制剂同时存在的环境中培养待分离菌群时，诱导型菌株不能生产诱导酶，无法正常生长，只有组成型突变株才能正常生长繁殖。
6光复活作用：指经UV照射后的微生物立即暴露在可见光下，就可出现死亡率明显降低的现象，是由于可见光激活光解酶使二聚体重新分解成单体造成的。
7化能自养型：一类能够进行无机物进行氧化而获得能量的微生物。指微生物利用化学能并能利用CO2来合成自身生命活动所需的有机物的营养类型
8定位诱变：用合成的DNA和重组DNA技术在基因精确限定的残基上引入突变。包括删除、插入和置换特定的碱基序列。
9生物膜：指生长在潮湿、通气的固体表面的一层由多种活微生物构成的粘滑、暗色菌膜，能氧化、分解污水中的有机物或有毒物质。
10移码突变：指在DNA上某个位置插入或缺失一个或几个碱基对（非3的倍数），此位置之后一系列遗传密码子的阅读框发生移位错误的突变。
11菌种退化：指由于自发突变的结果，而使某物种由于一系列生物学性状发生量变或质变的现象。退化是发生在群体细胞中的一个从量变到质变的逐步演变过程。
12共生关系：指两种微生物共居在一起，相互分工合作、相依为命，甚至达到难分难解、合二为一的及其紧密的一种相互关系。
13 nucleoid：拟核，指原核生物特有的无核膜包裹、无固定形态的原始细胞核。 14 PCR：聚合酶链式反应，即在体外改变温度使DNA链解链，并在Taq酶的作用下及引物存在时以两条链为模板合成新的DNA链的反应。
15 chemostat：恒化器，是一种设法使培养液的流速保持不变，并使微生物始终低于其最高生长速率条件下进行生长繁殖的连续培养装置。 三，问答
1试述普遍性转导噬菌体及转导子的形成机制。
答：一般以温和性噬菌体为媒介。当噬菌体在供体菌内增值时，宿主核染色体发生断裂，待噬菌体成熟进行包装之际，有极少数的噬菌体的衣壳把与噬菌体头部DNA核心大小相似的一小段供体DNA误包，形成了一个完全不含噬菌体自身DNA的完全缺陷噬菌体。当供体菌裂解时将少量的裂解物与大量受体菌接触，务必使感染复数小于1。这一完全缺陷噬菌体将供体DNA导入受体细胞，供体DNA与受体细胞核染色体上的同源区段配对，再通过双交换整合到染色体组上，从而使后者称为一个遗传稳定的重组体，即普遍转导子。 
2 何谓微生物的营养物质？试比较微生物吸收营养物质的各种方式。
答：微生物在生命活动中，从环境中吸取的用以提供能量、调节新陈代谢以及合成细胞物质的物质。
简单扩散：无载体蛋白参与下，单纯依靠物理扩散方式输送营养物质。输送动力：浓度梯度，不需要消耗能量；输送方向：顺浓度梯度；输送物质：水、气体、脂溶性物质、极性小的分子；输送机制：通过亲水小孔或脂双分子层。
促进扩散：在特异性载体蛋白的协助下，不消耗能量的一类扩散性运输方式。   输送动力：浓度梯度，不需要消耗能量；输送方向：顺浓度梯度；载体蛋白：需要，具有特异性；输送物质：极性大的分子，如真核微生物对糖的吸收；输送机制：被输送的物质与相应的载体之间存在一种亲和力。
主动运输：在消耗能量的同时，实现溶质在细胞内的浓缩，而没有任何化学变化发生的输送机制。输送动力：代谢能量；输送方向：逆浓度梯度；载体蛋白：需要，具有特异性；输送物质：氨基酸、某些糖、Na、K 等；输送机制：代谢能量改变底物与载体之间的结合力。
基团移位：被输送的基质分子在膜内经受了共价的改变， 以被修饰的形式进入细胞质的输送机制。输送动力：代谢能量，PEP上的高能磷酸键；输送方向：逆浓度梯度；载体蛋白：磷酸转移酶系统；被输送物质在输送前后的存在状态：在细胞膜内被磷酸化。 膜泡运输：通过趋化性运动靠近营养物质，将它吸附到膜表面，形成膜泡，并进入细胞质。
或使用下图作为答案：

试比较青霉素和溶菌霉在制备原生质体中的作用原理。
答：青霉素在细胞壁合成过程中，抑制转肽作用，影响肽桥的形成，从而细胞壁无法合成，形成原生质体。青霉素对革兰氏阳性菌敏感。
对于溶菌酶，会破坏肽聚糖中的β-1,4-糖苷键，导致双糖单位解链接，从而导致细菌因细胞壁肽聚糖的“散架”而成为原生质体。 
4写出两种活菌体生长量的测定方法名称及基本操作过程。
显微计数法：先用美蓝液对菌体进行染色，即在试管中加入一定体积的菌液和美蓝液，染色一段时间后，将菌液进行稀释制备成浓度适宜的菌悬液。取一滴菌悬液于血球计数板上，使菌液扩散均匀后至于显微镜下镜检计数，其中活细胞为无色，死细胞为蓝色。通过计算得出生长量。
平板菌落计数法：将样品作10倍系列稀释，取合适稀释度进行涂布或倾注平板，使微生物单细胞一一分散开来，培养后每个菌落代表一个活菌，根据每皿上的cfu数乘上稀释度即可推算出菌样的活菌数。 
5消毒和灭菌的概念有何不同？实验室常用的灭菌方法有那些？分别指出灭菌原理，优缺点，适用对象及注意事项
答：消毒是指采用较温和的理化因素，仅杀死物体表面或内部一部分对人体或动、植物有害的病原菌，而对被消毒的对象基本无害的措施。而灭菌是指采用强烈的理化因素使物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。
（1）干热灭菌法，原理：高温使蛋白等大分子降解或变性，菌体死亡；优点是灭菌效果好，缺点是干热灭菌需要时间长；适用对象及注意事项：灼烧适用于接种工具、污染物品、实验动物尸体等，要注意安全，干热箱法适用于玻璃、陶瓷器皿、金属用具等耐高温的物品，需要注意不要放入不耐热甚至易燃物品，注意安全。 （2）湿热灭菌法
① 巴氏消毒法。原理：利用较高的温度维持一定时间杀死；优点是可以保持灭菌物品原有的风味，缺点是灭菌不彻底；适用对象及注意事项：适用于牛奶、啤酒、果酒或酱油等不宜进行高温灭菌的液态风味食品或调料的低温消毒方法。需要注意灭菌的时间和温度。
②煮沸消毒法。原理：高温使蛋白等大分子降解或变性，菌体死亡；优点是操作简便，缺点是食用范围比较窄；一般用于饮用水的消毒。注意需要充分煮沸并保持一定时间。 ③间歇灭菌法。原理：常压蒸汽（100℃）处理杀死营养细胞，残留的芽孢等耐热的孢子体经过夜培养即可萌发，再加热处理杀死之，如此反复处理三次，可达到无菌状态；优点是可以保持培养基的营养，缺点是操作较麻烦时间较长；对象：含有不耐高温的营养物质的培养基或无高压蒸汽灭菌锅时处理一般培养基。注意不含营养物质的物品不宜适用此法。
④高压蒸汽灭菌法。原理：在加压条件下，水的沸点超过100℃，由此可提供高于100℃的水蒸气。优点是灭菌效果好、应用范围广、易操作，缺点是物品必须耐高温高压。对象：耐高温物品，一般培养基，生理盐水，缓冲溶液，玻璃、陶瓷器皿等。需注意灭菌锅的水位、定期对灭菌锅进行检查，注意操作安全。
（3）辐射灭菌。原理：微波、紫外线、g-射线、X-射线的杀菌作用。g-射线的穿透力非常强，可对密封包装后的物品进行灭菌。优点是可以对一定的空间消毒，可以对不耐热或受热易变质、变味的物品进行灭菌，缺点是一般只适用于表面灭菌。对象：不耐热或受热易变质、变味的物品。注意操作安全，做好防辐射的准备。
（4）化学消毒剂杀菌。原理化学消毒剂氧化性或与蛋白等大分子反应等作用。优点是适用方便，价格低廉，缺点是有些消毒剂对人体有害或有残留。对象比较广泛，可以对物体表面、实验室等进行灭菌。应该注意防止对人体有害。 
6设计从自然界中分离筛选产α－淀粉酶的芽孢杆菌的步骤，并简要说明每一步的理由及注意点 答：①采样：在面粉厂内的土壤或附近的水沟取5-15cm土样几十克，装入无菌牛皮低袋或塑料袋中。
理由：面粉厂的土壤中淀粉量比其他地方高，那么可可利用淀粉的微生物数量应该也会多
注意：记录：时间，地点，环境情况等；样品袋应封好口，防止水分失去；土样应在分离前破碎；尽快分离
②富集培养：先将样品进行热处理，然后将样品置于以淀粉为唯一碳源的培养基中培养，控制合适的温度、pH等条件。
理由：进行热处理提高芽孢杆菌的比例，以淀粉为唯一碳源有利于产α－淀粉酶的微生物生长。
③纯种分离：将培养物进行稀释，稀释至合适浓度，涂布滴有碘液的平板上。淀粉被分解掉的部分不显现蓝色，出现透明圈，可以通过透明圈的大小来初步判断菌种产淀粉的能力。
理由：进过富集培养后，菌液仍是混合菌液，因此需要进行平板分离。加入碘液是为了快速筛选出可以产生淀粉酶的菌种。
④平板初筛：将分离出的菌种进行培养，镜检是否产生芽孢。
⑤筛选：初筛：将每个菌种接种200瓶，然后复筛即选出50株，每株接种4瓶。选择产淀粉酶的优良菌种。如果达不到要求可以反复进行初筛、复筛以达到目标。 理由：初步筛选出的产淀粉酶的芽孢杆菌需要进过筛选，选择淀粉酶的高产菌株。 ⑥培养工艺条件试验与生产试验：还可以将筛选的菌种进行条件实验和生产试验 理由：可以获得更适合生产的菌株
⑦菌种保藏：将筛选出的优良菌株用合适的方法进行保藏。 理由：更好地保藏优良菌种，防止菌种退化。 注意在培养基中加入淀粉或以淀粉为碳源。
7在选育氨基酸高产菌时，经常通过筛选结构类似物抗性突变株以解除目的产物对其合成途径中关键酶的反馈抑制（反馈阻遏）作用。试举例说明并讨论其机理

筛选甲硫氨酸缺陷型及苏氨酸结构类似物抗性突变株。原因甲硫氨酸缺陷型不能产生甲硫氨酸，由于产生甲硫氨酸的支路被截断，只需提供少量甲硫氨酸黄色短杆菌即可生长，合成方向转向苏氨酸合成。又由于甲硫氨酸存在量很少，因此解除了甲硫氨酸的反馈阻遏。
通过筛选苏氨酸结构类似物抗性突变株的方法筛选抗苏氨酸反馈抑制型，由于苏氨酸结构类似物仅仅具有与苏氨酸相似的结构而不具有生物活性，因此苏氨酸结构类似物不能被利用，一直维持在较高浓度下，因此始终处于抑制状态，合成不能进行。苏氨酸结构类似物抗性突变株，说明结构类似物的反馈抑制被解除，此时苏氨酸的反馈抑制也被解除，因此即使苏氨酸大量积累，反应依然能顺利地向苏氨酸合成的方向进行。最终大量合成苏氨酸。