2007年硕士学研究生入学考试试题及答案
一，名词解释（3*15）
1.接合孢子：由菌体生出形态相同或略有不同的配子囊接合而成的，相接触的两个配子囊之间的横隔消失，其细胞质和核互相配合，同时外部形成厚壁，此即接合孢子。 2.局限性转导：通过部分缺陷噬的温和噬菌体把供体菌的少数特定基因携带到受体菌中，并获得表达的转导现象。
3.碳源物质：凡是可以作为微生物细胞结构或代谢产物中碳架来源的营养物质，均可作为微生物的碳源。糖类及其衍生物、有机酸、脂肪、烃类甚至二氧化碳或碳酸盐均可作为微生物的碳源。
4.芽孢：某些细菌在其生活史的一定阶段，在营养细胞内形成一个圆形、椭圆形或圆柱形的休眠体，称为芽孢，芽孢对不良环境尤其是对热具有较强的抗性。
5基团移位：指一类既需特异性载体蛋白的参与，又需耗能的一种物质运送方式，其特点是溶质在运送前后还会发生分子结构的变化，因此不同于一般的主动运输。基团移位主要用于运送各种糖类，核苷酸，丁酸和腺嘌呤等物质。
6.移码突变：指诱变剂会使DNA序列中的一个或少数几个非3倍数核苷酸发生增添或缺失，从而使该处后面的全部遗传密码的阅读框架发生改变，并进一步引起转录和转译错误的一类突变。 7.生长因子：微生物生长不可缺少的，且不能用简单的碳、氮源自行合成的微量有机物，包括维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶及它们的衍生物、脂肪酸及其他膜成分。
8.准性生殖 ：一种在同种而不同菌株的体细胞间发生的融合，它不借减数分裂而导致低频率基因重组并产生重组子。是在自然条件下，真核微生物体细胞间的一种自发性的原生质体融合现象。
9.巴斯德灭菌：是一种利用较低的温度既可杀死病菌又能保持物品中营养物质风味不变的消毒法。巴斯德灭菌法应用于酒、啤酒、乳类、奶油和各种腌制食物的调制。 10.连续灭菌：就是将配好的培养基在向发酵罐等培养装置输送的同时进行加热、保温和冷却而进行灭菌。连续灭菌时，培养基可在短时间内加热到保温温度，并且能很快地冷却，因此可在比间歇灭菌更高的温度下进行灭菌，而由于灭菌温度很高，保温时间就相应地可以很短，极有利于减少培养基中的营养物质的破坏。
11.HFR菌株：高频重组菌株。指细菌接合时，将染色体以高频率传递给雌性菌（F-菌）而形成重组体的雄性菌。
12.对数生长期：延滞期以后，由于养分、空间充裕，排出的代谢物还不足以影响生长，所以细胞高速生长达到生长速率最高的时期。这时菌数以几何级数增加，即进入了对数期。
13.prophage：前噬菌体。在细菌细胞内保持非感染性状态的噬菌体。处于前噬菌体状态下，噬菌体基因组的增殖与细菌染色体的增殖紧密联系着，此时前者可插入后者中作为染色体的一部分，也可作为染色体外的质粒存在。
14.prototroph：原养型。指在基本培养基中能增殖的，在营养上独立的细胞、个体或系统。为营养缺陷型的对应词。
15.PCR：聚合酶链式反应，一种体外在DNA聚合酶的催化下，通过两条人工合成的单链引物的引导而扩增模板DNA分子上两引物序列之间DNA片段的方法。 二，问答题
1微生物菌名的命名法则是什么？并举例说明。
答：双命名法指一个物种的学名由前面一个属名和后面一个种名加词两部分构成，属名的词首须大写，种名加词的字首须小写，出现在分类学文献中的学名，在上述两部分后还应加写3项内容，即首次定名人，现定名人和现定名年份。如:Escherichia coli（Migula）Castellani et Chalmers 1919。 
2霉菌形态观察中，制片常用的是什么染色剂？试说明每种成分的主要作用。
答：乳酸酚棉兰染色液。乳酸20ml,石炭酸20g,甘油40ml,蒸馏水20ml,混成以上成分后再加入50mg棉兰染料混匀。室温保存备用。可见，乳酸和苯酚对微生物均有杀灭作用，真菌被棉蓝染成蓝色，甘油可起保存封片的作用。 
3举例讨论微生物之间的互生、共生、竞争、寄生和拮抗关系。 答案见04年问答题3题 
4试叙述细菌和酵母细胞壁的化学组成和结构的特点。 答：（1）革兰氏阳性菌   细胞壁厚度大、组成简单，主要是肽聚糖和磷壁酸组成。 肽聚糖由双糖单位、肽桥、四肽尾组成。双糖单位：N-乙酰胞壁酸（NAM）和N-乙酰葡萄糖胺（NAG）通过1，4糖苷键相连而成。短肽：L-Ala-D-Glu-L-Lys-D-Ala 。肽桥：短肽之间连接。短肽全部或部分连至NAM上，短肽之间也有连接，组成一网状结构。肽聚糖是细菌细胞壁特有成分，也是原核微生物特有成分（古生菌没有）
磷壁酸(垣酸）是G+特有成分。多元醇与磷酸复合物，通过磷酸二酯键与NAM相连。根据多元醇不同，有甘油型、核糖醇型等5种类型。主要功能：使壁形成负电荷环境，吸附二价金属离子，维持壁硬度和一些酶活性。还可提供噬菌体位点。
（2）革兰氏阴性菌    细胞壁薄、层次多，成分较复杂，机械强度较革兰氏阳性菌弱。内壁层：厚2-3 nm，单（双）分子层，由肽聚糖构成。与G+区别：交联低；DAP取代 L-Lys；肽桥。外膜：脂蛋白，以脂类部分与肽聚糖相连；磷脂层，脂多糖。脂多糖LPS是G-特有成分，由类脂A + 核心多糖 + O-侧链组成。
（3）酵母细胞壁：厚0.1-0.3um，分三层，由酵母纤维素组成，外层甘露聚糖、内层葡聚糖都是分支状聚合物，中间夹着一层蛋白质。葡聚糖是赋予细胞壁机械强度的主要成分。在芽痕周围还有几丁质。用蜗牛酶（heliase）破坏壁来制备原生质体。 
5好氧微生物液体培养主要有那些形式？他们各自有哪些用途和特点？ 答：（1）试管液体培养，此法通气不太理想，只适合培养兼性厌氧菌。 （2）三角瓶浅层液体培养，静止状态下，其通气量与装液量和通气塞的状态关系密切。 （3）摇瓶培养：将微生物置于一定容积的三角瓶培养基中，瓶口用8层纱布包扎，既可通气又可防杂菌，置于摇床上震荡，利于溶氧。经过培养生长，最后一次收获。广泛用于菌种筛选和生理、生化、发酵和生命科学的多领域研究中。
（4）发酵罐培养，高科技的生物反应器，有良好的通气、搅拌和其他各种必要装置。应用方便。广泛应用于实验研究和生产。 （5）连续培养方法
    若不断补充新鲜营养，并及时不断以同样速度排出培养物，则可延长对数期。只要培养液的流动量能使增殖的新菌数相当于流出的老菌数，就可保证总菌量不变，此即连续培养原理。
主要参数：D（稀释率）=F（流动速率）/V（容积） 1、恒浊连续培养 turbidostat
不断调节流速使培养液浊度保持恒定。装置：恒浊器
    适用：主要应用于生产中，收获菌体及与菌体相平行的产物。 2、恒化连续培养 chemostat
恒定流速，及时补充营养，营养物浓度基本恒定，从而保持恒定生长速率。又称恒组成连续培养。培养基成分中，必须将某种必需的营养物控制在较低的浓度，以作为限制性因子，而其它营养物过量。常用的有氨、氨基酸、葡萄糖、生长因子、无机盐等。     适用；主要用于实验室科研 
6设计方案从自然界中分离筛选蛋白酶产生芽孢杆菌的步骤，并简要说明每一步的理由及注意点。
答案见04年简单题8题 
7试叙述以野生型大肠杆菌为出发株，采用紫外线诱变技术，获得一株氨基酸营养缺陷型突变株的操作过程。
①诱变处理：对该野生型大肠杆菌进行诱变处理，对其菌悬液进行紫外线照射和光照复活的交替处理，以增加突变率。也可采用其他的诱变方式如复合处理及同一诱变剂连续重复处理。
②后培养：诱变处理后，立即将处理过的细胞转移到营养丰富的培养基中进行培养，使突变基因稳定并纯合表达。遗传物质经诱变处理后发生的改变，必须经过DNA的复制才能稳定成突变基因，而突变基因则要经过转录和蛋白质的合成才能表达，呈现突变型表型。
③淘汰野生型：经后培养后的细胞中除了有营养缺陷型，大肠杆菌外还含有大量的野生型菌株，需要把野生型细胞大量淘汰，起到“浓缩”缺陷型的作用。采用抗生素法淘汰野生型，在加有青霉素的基本培养基中接入菌种后，由于野生型的细胞对青霉素敏感而被杀死，而营养缺陷型处于休止状态，不需要合成细胞壁，所以不被杀死，起到了相对浓缩的目的。为了防止由于细胞内源性营养物质的存在而引起的“误杀”，在浓缩前就必须先使细胞耗尽体内或表面的营养。
④缺陷型的检出：利用影印培养法将缺陷型从群体中分离检出，将用浓缩法得到的培养物接种到完全培养基的平板上，经过培养长出菌落，采用一种专用的接种工具----“印章”，一次将一个完全培养基平板上长出的菌落转接到基本培养基上，经过培养分别观察在两个平板相应位置上长出的菌落，如果在完全培养基平板上生长，而在基本培养基上不生长，可初步认定是营养缺陷型。
⑤缺陷型的坚定：将待测菌株从生长斜面上用无菌生理盐水洗下，取0.1ml涂布在基本培养基上，用无菌滤纸蘸取氨基酸营养混合液，贴于琼脂表面，若在滤纸片周围出现生长圈，则表明该菌样为氨基酸营养缺陷型。 答案可参考04年简答题7题进行整合
 
8试从遗传学角度讨论人为打破微生物代谢的自动调节、过量积累中间代谢产物的3种方法。
（1）应用营养缺陷型
    单线途径：应用营养缺陷型积累中间代谢物，采用低浓度终产物供给。 （2）筛选抗反馈突变株（解除反馈）    在含有抗代谢物的培养基中培养，筛选抗性突变株，其中一些可分泌大量末端产物。如对氨基Phe/Tyr, 7-氮杂Trp/Trp （3）控制细胞膜渗透性 （4）筛选渗漏营养缺陷型