2012微生物（发酵）回忆版
一， 判断题
1， 显微镜下直接计数的酵母比平板菌落计数的结果大。√
2， 接合孢子和子囊孢子都是，减数分裂都发生在孢子萌发时。×（子囊孢子发生在孢子形成过程中。）
3， 微生物细胞壁的去除使鞭毛失去了着生位点。×
4， 一般情况下，土壤中细菌的总数和生物量往往都是高的。√
5， 红曲霉、灰色链霉菌和产黄青霉都产生分生孢子。×
6， 在琼脂糖凝胶电泳中，环状双链DNA分子不同构象的涌动速率不同，其中线性DNA的涌动速率最慢。√
7， 发生移码突变后，编码的蛋白一般都变短。√
8， 啤酒、牛奶等风味食品，都是以细菌菌落总数和大肠杆菌数作为食品卫生的标准× 9， 微生物N-氨基酶基因改变，有利于提高基因组的突变频率。√
10， 普遍性转导产生的转导子一般都是溶源菌。×
二，名词解释
1， 大肠菌群：指像大肠杆菌等一些G-、无芽孢、能发酵乳糖产酸产气的兼性厌氧菌。 2， 生长因子：需要量很少，但是调节微生物正常代谢所必须的、又不能由简单的碳氮源自行合成的有机物，如：维生素、氨基酸、碱基等。
3， 原噬菌体：前噬菌体。在细菌细胞内保持非感染性状态的噬菌体。处于前噬菌体状态下，噬菌体基因组的增殖与细菌染色体的增殖紧密联系着，此时前者可插入后者中作为染色体的一部分，也可作为染色体外的质粒存在。
4， 三域学说：是指将生物分为三个“域”，分别是细菌域、古生菌域、真核生物域。 5， 菌落：当单个细菌细胞或者一小堆同种细胞接种到固体培养基表面，当它占有一定的发展空间并处于适宜的培养条件下时，该细胞就会迅速生长繁殖并形成细胞堆，此即菌落。
6， SOS修复：是指DNA受到严重损伤、细胞处于危急状态时所诱导的一种DNA修复方式，修复结果只是能维持基因组的完整性，提高细胞的生成率，但留下的错误较多，它属于一种倾向差错的修复。
7， PCR：聚合酶链式反应，即在体外改变温度使DNA链解链，并在Taq酶的作用下及引物存在时以两条链为模板合成新的DNA链的反应。
8， 巴斯的效应：在有氧情况下，由于呼吸作用，酒精产量大大下降，糖的消耗速率大幅减慢，氧的吸收抑制发酵的想象。对酵母菌而言，乙醇发酵属于厌氧发酵，如果将厌氧条件改为好氧条件，葡萄糖分解效率降低，发酵停止的现象。
9， 嗜高温微生物：最适生长温度在80℃以上的微生物，已发现的嗜高温微生物全都是古生细菌。
10，高压蒸汽灭菌：指将待灭菌物体至于高压蒸汽灭菌锅内或发酵罐内，产生或通入高温高压蒸汽使灭菌物体升温从而达到灭菌的目的。一般灭菌条件为121°C保持20min。
2013年微生物学综合（发酵）真题（回忆版）
一.选择题,带﹡的为多选题,每题2分,共30分。
12﹡.下列哪些过程可以在无氧条件下进行 ACF
A反硝化作用 B硝化作用 C柠檬酸合成 D、 E、F同型乳酸发酵 14﹡.下列哪种方法可以用来测定单细胞微生物的生物量 ABD
A平板菌数计数法 B计数器法 C细胞堆积法 D比浊法
15﹡.下列哪些是多细胞微生物 ABC
A产黄青霉 B黑曲霉 C灰色链霉菌 D华根霉
二.名词解释，每题3分，共30分。
1.BOD5：5日生物需氧量，生物需氧量一般指1L污水，当微生物对其氧化、分解时，所消耗的氧的毫克数。一般规定条件为20°C5昼夜，此即为BOD5
2局限转导：局限转导是由部分缺陷的温和噬菌体将少数特定基因携带到受体中并与后者的基因组整合、重组，形成转导子的过程。
3.Biofilm：生物膜，指生长在潮湿、通气的固体表面的一层由多种活微生物构成的粘滑、暗色菌膜，能氧化、分解污水中的有机物或有毒物质。
4.重组修复：DNA复制后修复。必须通过DNA复制过程中两条DNA链的重组交换而完成DNA的修复。
5.拮抗作用：略
6间体：它是一种由细胞膜内褶而形成的囊状构造，其内充满着层状或管状的泡囊。多见于G+细菌。每个细胞含一至数个。
7对数生长期：延滞期以后，由于养分、空间充裕，排出的代谢物还不足以影响生长，所以细胞高速生长达到生长速率最高的时期。这时菌数以几何级数增加，即进入了对数期。
8.高压蒸汽灭菌法（不太确定）：指将待灭菌物体至于高压蒸汽灭菌锅内或发酵罐内，产生或通入高温高压蒸汽使灭菌物体升温从而达到灭菌的目的。一般灭菌条件为121°C保持20min。
9.可变基因（不太确定）
10.viable but nonculturabe(VBNC) bacterial：不可培养菌，不含营养物质的盐水中，经常长时间的低温保存，细菌会进入一种数量不减、有代谢活力、但在正常试验室培养条件下不能生长产生菌落的状态，称为活的但不能培养。
三.问答题。15×6=90分
1.就微生物的繁殖方式谈谈你对微生物多样性的认识。
答：原核：
细菌，裂殖，繁殖过程中的自发突变、基因重组，接合等。
蓝细菌：二分裂、多分裂、孢子、链丝段：直链藻细胞链断裂形成的片段。
放线菌：液体培养时菌丝断裂；孢子繁殖：分生孢子、孢子囊孢子。
真核：
藻类：无性繁殖：二分裂；有性繁殖：如绿藻、金藻、甲藻。
酵母菌：无性，芽殖、裂殖、笌裂生殖；有性，产生子囊孢子。
霉菌：菌丝断裂：液体培养；无性孢子：游动孢子、孢子囊孢子、分生孢子、节孢子、厚垣孢子；有性孢子：卵孢子、接合孢子、子囊孢子
担子菌：无性繁殖，芽殖、裂殖，产生分生孢子、粉孢子。有性繁殖，产生担孢子。 噬菌体：侵入宿主进行裂解性循环或产生溶源菌。
首先繁殖方式的多样性体现了生物多样性；由于繁殖方式多样，有各种造成变异的方式，从而使生物具有多样性。在诸葛健的微生物学课本上有介绍，我不在具体叙述，请同学们简要叙述，以把握时间。
2.叙述E.coli.234、PUC19、ECORⅠ、PCR、T4DNAligase在基因工程的作用。(其中数字为乱填的，忘记了)
答：E.coli.234：宿主，将构建好的载体，导入大肠杆菌，使目的基因进行表达或克隆。
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PUC19：质粒载体，将目的基因连接到质粒上构建重组载体。
ECORⅠ：一种，内切酶用于获得目的基因并切割质粒载体。
PCR：用于扩增目的基因和质粒载体
T4DNAligase：用于将切割好的质粒和目的基因进行连接。
3.根据以下给出的培养条件，说出其适应哪类微生物的生长。并分别说出其碳源、氮源、能源以及产能方式。
培养基配方：葡萄糖，NH4NO3,MgSO4,CaHPH4、NaCl、生长因子等。
1）不提供葡萄糖，有氧，阳光；
光合自养好氧微生物：碳源：二氧化碳；氮源：NH4NO3；能源：阳光；产能方式：光合作用
2） 不提供葡萄糖，有氧，黑暗；
化能自养好氧微生物：碳源：二氧化碳；氮源：NH4NO3；能源：NH4NO3；产能方式：发酵
3） 有氧，黑暗；
化能异养的好氧微生物：碳源：葡萄糖；氮源：NH4NO3；能源：葡萄糖；产能方式：有氧呼吸
4） 无氧，黑暗；
化能异养的厌氧微生物：碳源：葡萄糖；氮源：NH4NO3；能源：葡萄糖；产能方式：无氧呼吸或发酵
5） 不加NH4NO3，有氧，有阳光。
化能异养的固氮微生物：碳源：葡萄糖；氮源：N2；能源：葡萄糖；产能方式：有氧呼吸
4.请谈谈实验室和发酵工厂中常用的6种灭菌（消毒）方法，阐明其原理及适用对象。 答：①干热灭菌法，原理：高温使蛋白等大分子降解或变性，菌体死亡；优点是灭菌效果好，缺点是干热灭菌需要时间长；适用对象：灼烧适用于接种工具、污染物品、实验动物尸体等。
②高压蒸汽灭菌法。原理：在加压条件下，水的沸点超过100℃，由此可提供高于100℃的水蒸气。优点是灭菌效果好、应用范围广、易操作，缺点是物品必须耐高温高压。对象：耐高温物品，一般培养基，生理盐水，缓冲溶液，玻璃、陶瓷器皿等。
③间歇灭菌法。原理：常压蒸汽（100℃）处理杀死营养细胞，残留的芽孢等耐热的孢子体经过夜培养即可萌发，再加热处理杀死之，如此反复处理三次，可达到无菌状态；优点是可以保持培养基的营养，缺点是操作较麻烦时间较长；对象：含有不耐高温的营养物质的培养基或无高压蒸汽灭菌锅时处理一般培养基。
④辐射灭菌。原理：微波、紫外线、g-射线、X-射线的杀菌作用。g-射线的穿透力非常强，可对密封包装后的物品进行灭菌。优点是可以对一定的空间消毒，可以对不耐热或受热易变质、变味的物品进行灭菌，缺点是一般只适用于表面灭菌。对象：不耐热或受热易变质、变味的物品。注意操作安全，做好防辐射的准备。
⑤化学消毒剂杀菌。原理化学消毒剂氧化性或与蛋白等大分子反应等作用。优点是适用方便，价格低廉，缺点是有些消毒剂对人体有害或有残留。对象比较广泛，可以对物体表面、实验室等进行灭菌。
⑥巴氏消毒法。原理：利用较高的温度维持一定时间杀死；优点是可以保持灭菌物品原有的风味，缺点是灭菌不彻底；适用对象：适用于牛奶、啤酒、果酒或酱油等不宜进行高温灭菌的液态风味食品或调料的低温消毒方法。
5.筛选一株Strer菌株，简述操作流程及其目的和注意事项。
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答：①菌悬液的制备：将菌株培养至对数生长期，并制备成浓度适宜的菌悬液。目的是使菌体受诱变均匀且剂量合适，注意菌液浓度要合适②诱变处理：选择合适的诱变剂合适的剂量以合适的方法对菌株进行诱变。③后培养：诱变处理后，立即将处理过的细胞转移到营养丰富的培养基中进行培养，使突变基因稳定并纯合表达。遗传物质经诱变处理后发生的改变，必须经过DNA的复制才能稳定成突变基因，而突变基因则要经过转录和蛋白质的合成才能表达，呈现突变型表型。后培养培养基营养要求丰富，含有丰富的碱基和生长因子。注意培养基营养一定要丰富④筛选：利用梯度平板法进行筛选，首先制作链霉素浓度梯度平板，然后将后培养的菌液稀释后制成单细胞悬液涂布梯度平板，置于合适条件下培养。链霉素浓度越高的位置长出的菌落抗性越强。注意一定要制备但细胞悬液。⑤菌种保藏：将筛选出来的抗性菌株在合适条件下进行保存，注意培养基中加入适量链霉素。
1. 分析下列图表中所表现出来的现象。（图为一般常见的赖氨酸途径图）


①野生菌：受到反馈抑制②:Met-：切断小分支，Thr流量增加，反馈抑制更强，所以比野生菌更少③Thr-：Thr支路被切断，支路反馈抑制减弱，流量增加，因此Lys减少④Hser-：支路切断，Lys支路流量增加⑤Hser-+AERr：支路切断，Lys支路流量增加；并且利用结构类似物抗性突变筛选了Lys突变，解除了反馈抑制，流量进一步增加。