此法的缺点是：
（1）由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此Bradford法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作标准曲线时通常选用g—球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。
（2）仍有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质有：去污剂、 Triton X-100、十二烷基硫酸钠（SDS）和0.1N的NaOH。（如同0.1N的酸干扰Lowary法一样）。
（3）标准曲线也有轻微的非线性，因而不能用Beer定律进行计算，而只能用标准曲线来测定未知蛋白质的浓度。
（二）试剂与器材
1. 试剂：
（1）标准蛋白质溶液，用g—球蛋白或牛血清清蛋白(BSA)，配制成1.0mg/ml和0.1mg/ml的标准蛋白质溶液。
（2）考马斯亮兰G—250染料试剂：称100mg考马斯亮兰G—250，溶于50ml 95%的乙醇后，再加入120ml 85%的磷酸，用水稀释至1升。
2. 器材：
（1）可见光分光光度计
（2）旋涡混合器
（3）试管16支
（三）操作方法
1. 标准方法
（1）取16支试管，1支作空白，3支留作未知样品，其余试管分为两组按表中顺序，分别加入样品、水和试剂，即用1.0mg/ml的标准蛋白质溶液给各试管分别加入：0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml，然后用无离子水补充到0.1ml。最后各试管中分别加入5.0ml考马斯亮兰G—250试剂，每加完一管，立即在旋涡混合器上混合（注意不要太剧烈，以免产生大量气泡而难于消除）。未知样品的加样量见下表中的第8、9、10管。
（2）加完试剂2~5分钟后，即可开始用比色皿，在分光光度计上测定各样品在595nm处的光吸收值A595，空白对照为第1号试管，即0.1mlH2O加5.0mlG—250试剂。
注意：不可使用石英比色皿（因不易洗去染色），可用塑料或玻璃比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇荡洗，以洗去染色。塑料比色皿决不可用乙醇或丙酮长时间浸泡。
考马斯亮兰法实验表格：
管 号1 2 3 4 5 6 7 8 9 10标准蛋白质0 0.01 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10
(1.0mg/ml)
未知蛋白质0.02 0.04 0.06
(约1.0mg/ml)
蒸馏水0.1 0.09 0.08 0.06 0.04 0.02 0 0.08 0.06 0.04
考马斯亮蓝
G－250试剂5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0每管中的蛋
白质量（mg）
光吸收值
（A595）
（3）用标准蛋白质量（mg）为横座标，用吸光度值A595为纵座标，作图，即得到一条标准曲线。由此标准曲线，根据测出的未知样品的A595值，即可查出未知样品的蛋白质含量。
0.5mg牛血清蛋白/ml溶液的A595约为0.50。
2. 微量法
当样品中蛋白质浓度较稀时（10－100mg/ml）,可将取样量（包括补加的水）加大到0.5ml或1.0ml, 空白对照则分别为0.5ml或1.0ml H2O, 考马斯亮蓝G－250试剂仍加5.0ml, 同时作相应的标准曲线，测定595nm的光吸收值。
0.05mg牛血清蛋白/ml溶液的A595约为0.29。
底物对酶促反应速度的影响:
底物浓度较低时,正比例关系影响(一级反应)
底物浓度提高,反应速度还在加快,无、幅度越来越小,混合级反应
最后底物浓度再高,反应速度也已经基本不变,说明全部酶分子都已经和底物结合,接近饱和状态(零级反应)

温度对酶促反应速度的影响
一方面升高温度可以增加活化分子数目,反应速度提高;
另一方面温度超过一定范围会导致酶蛋白变性失活,使酶促反应速度降低.酶促反应速度最快时的反应温度称为该酶促反应的最适温度.

pH值对酶促反应速度的影响
反应体系的pH直接影响到酶和底物的解离状态,从而影响到酶与底物的结合,影响到酶促反应的速度.使酶促反应速度达到最快时的pH值称为酶促反应的最适pH值.

抑制剂对酶促反应速度的影响
能特异性的抑制酶活性,从而抑制酶促反应的物质称为抑制剂.

激活剂对酶促反应速度的影响
能使酶从无活性到有活性或使酶活性提高的物质称为酶的激活剂.

重要：1。DNA溶于苯酚而RNA不溶,故可用苯酚来沉淀
         这是最简单的方法。
      2。利用吖啶橙的变色特性可鉴别DNA和RNA。吖啶橙作为一种荧光染料已被用于染色固定，非固定细胞核酸，或作溶酶体的一种标记。观察死亡细胞荧光变色性变化以及区别分裂细胞和静止细胞群体。虽然测定DNA和RNA含量时较难获得好的重复性结果，但该方法已被许多实验室广泛采用。

下面是生物化学的总结知识
1.两性解离：DNA无，只有酸解离（○P），碱基被屏蔽（在分子内部形成了H键）。
            RNA有，有PI。
2.粘度大：DNA>RNA，粘度由分子长度/直径决定，DNA为线状分子，RNA为线团。
3.碱的作用：DNA耐碱
            RNA易被碱水解。
4.显色反应：鉴别DNA和RNA
                   浓HCl                                   浓HCl
                    RNA ------→ 绿色化合物   DNA ------→ 蓝紫色化合物
           苔黑酚 二苯胺
           啡啶溴红（荧光染料）和溴嘧啶都可对DNA染色，原理是卡在分子中，DNA的离心
           和电泳显色可用它们。
5.溶解性：都溶于水而不溶于乙醇，因此，常用乙醇来沉淀溶液中的DNA和RNA。DNA溶于苯酚而RNA不溶，故可用苯酚来沉淀RNA。