10 细胞骨架(cytoskeleton)
11 内质网（endoplasmic reticulum）：是真核细胞细胞质内广泛分布的由膜构成的扁囊、小管或小泡连接形成的连续的三维网状膜系统，是一种重要的细胞器。内质网通常占细胞膜系统的一半左右，体积约占细胞总体积的10%以上，分为糙面内质网和光面内质网两种。
12 反义RNA（antisense RNA）：与靶核酸(如mRNA或有义DNA)链互补的RNA分子，可抑制靶核酸的功能。指与mRNA互补的RNA分子，也包括与其它RNA互补的RNA分子。由于核糖体不能翻译双链的RNA，所以反义RNA与mRNA特异性的互补结合, 抑制了该mRNA的翻译。通过反义RNA控制mRNA的翻译是原核生物基因表达调控的一种方式，最早是在E.coli 的产肠杆菌素的Col E1质粒中发现的，许多实验证明在真核生物中也存在反义RNA。近几年来通过人工合成反义RNA的基因, 并将其导入细胞内转录成反义RNA，即能抑制某特定基因的表达，阻断该基因的功能，有助于了解该基因对细胞生长和分化的作用。
二、问答题（以下5题任选4题，每题16分，共64分）
1 试述细胞膜的化学组成
2 试述线粒体的遗传学－半自主性
3 以图解叙述细胞的有丝分裂及其调控
4 试述哺乳动物的受精作用和哺乳动物克隆的不同点
答：受精作用：指依靠父方产生的雄性细胞(精子)与母方产生的雌性细胞(卵子)融合(受精)成受精卵(合子)，再由受精卵经过一系列细胞分裂长成胚胎，最终形成新的个体。这种依靠父母双方提供性细胞、并经两性细胞融合产生后代的繁殖方法称为有性生殖。
   克隆：指将含有遗传物质的供体细胞的核移植到去除了细胞核的卵细胞中，利用微电流刺激等使两者融合为一体，然后促使这一新细胞分裂繁殖发育成胚胎，当胚胎发育到一定程度后，再被植入动物子宫中使动物怀孕，便可产下与提供细胞核者基因相同的动物。这一过程中如果对供体细胞进行基因改造，那么无性繁殖的动物后代基因就会发生相同的变化。
    克隆技术不需要雌雄交配，不需要精子和卵子的结合，只需从动物身上提取一个单细胞，用人工的方法将其培养成胚胎，再将胚胎植入雌性动物体内，就可孕育出新的个体。这种以单细胞培养出来的克隆动物，具有与单细胞供体完全相同的特征，是单细胞供体的“复制品”。
5 试述造血干细胞的分化
答：造血干细胞（hemopoietic stem cell, HSC）：是存在于造血组织中的一群原始造血细胞，它不是组织固定细胞，可存在于造血组织及血液中，具有自我再生和发育为各种血细胞的特性。
造血干细胞在人胚胎2周时刻出现于卵黄囊，第4周开始转移至胚肝，妊娠5个月后，骨髓开始造血，出生后称为干细胞的主要来源。干细胞在造血组织中所占比例很少。造血干细胞包括三级分化水平，即 多能干细胞（pluoripotent stem cell），定向干细胞(committed stem cell)或称造血祖细胞(hemopoietic progenitor)及其成熟的子代细胞。
多能干细胞可进一步分化为多能定向髓系干细胞及淋巴系干细胞，淋巴系干细胞是T和B淋巴细胞的共同祖先细胞。
单能定向干细胞具有特定细胞系分化能力，也称为祖细胞。可分化为红细胞的红系干细胞，粒细胞和单核细胞的粒、单核细胞干细胞系及血小板的巨核干细胞系。
造血干细胞的分化有赖于造血干细胞所处的造血微环境（hemopietic inductive microenvironment, HIM）。HIM由局部的造血基质细胞及其分泌的细胞因子和细胞外基质组成。

中国科学院动物研究所细胞生物学2003年博士研究生入学试题
一、名词解释 （每题3分，共30分）
1 原癌基因（Oncogene)：调控细胞生长和增殖的正常细胞基因，是维持机体正常生命活动所必须的，在进化上高等保守。当原癌基因的结构或调控区发生变异，基因产物增多或活性增强时，使细胞过度增殖，从而形成肿瘤。
2 信号肽（Signaling peptide)
3 细胞周期（Cell cycle)
4 高尔基体（Golgi apparatus)：也称高尔基复合体、高尔基器，是真核细胞中内膜系统的组成之一，由许多扁平的囊泡构成的以分泌为主要功能的细胞器，它由扁平膜囊（saccules）、大囊泡（vacuoles）、小囊泡（vesicles）三个基本成分组成。为意大利细胞学家高尔基Golgi于1898年首次用银染方法在神经细胞中发现。
5 干扰RNA（Interference RNA)：与靶基因同源的双链RNA诱导的特异转录后基因沉默现象。其作用机制是双链RNA被特异的核酸酶降解，产生干扰小RNA(siRNA)，这些siRNA与同源的靶RNA互补结合，特异性酶降解靶RNA，从而抑制、下调基因表达。已经发展成为基因治疗、基因结构功能研究的快速而有效的方法。
6 免疫印迹（Western Blotting）：又称蛋白质印迹，是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种免疫生化技术。由于免疫印迹具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。结合化学发光检测，可以同时比较多个样品同种蛋白的表达量差异。
7 干细胞（Stem cell)：是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞(embryonic stem cell，ES细胞)和成体干细胞(somatic stem cell)。根据干细胞的发育潜能分为三类：全能干细胞(totipotent stem cell,TSC)、多能干细胞（pluripotent stem cell）和单能干细胞（unipotent stem cell）。干细胞(Stem Cell)是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞”。
 8 突触（Synapse)：指神经元之间或神经元与效应器之间相互接触、并借以传递信息的部位。通过突触可使神经冲动信息作定向传导，对信息进行传递和收集是突触的主要作用。神经元的轴突末梢经过多次分支，每一小支的末端膨大呈杯状或球状，叫做突触小体。这些突触小体可以与多个神经元的细胞体或树突相接触，形成突触。突触由突触前膜、突触间隙和突触后膜三部分构成。
9 细胞骨架（Cytoskeleton)：真核细胞中与保持细胞形态结构和细胞运动有关的蛋白纤维网络。包括微管、微丝和中间丝。广义的细胞骨架还包括细胞核中存在的核骨架-核纤层体系。核骨架、核纤层与中间纤维在结构上相互连接,贯穿于细胞核和细胞质的网架体系。
 10 端粒（Telomere）：真核细胞内线性染色体末端的一种特殊结构，为一特定的DNA-蛋白质复合体结构。其DNA序列由对生物特异的简单的串联重复单位组成，能抵消每一轮DNA复制中因染色体降解而造成的关键功能码序列的丢失。功能是：稳定染色体末端结构，防止染色体间末端连接，并可补偿滞后链5'末端在消除RNA引物后造成的空缺。
二、综述题
1 简述生物膜的分子和结构基础，核膜在细胞周期中的变化规律。分析核孔复合体在物质转运的结构基础（15分）
答：生物膜主要由脂类和蛋白质组成。细胞膜表面还存在少量的糖类，形成糖脂和糖蛋白。（大体上脂类约占总量的50%，蛋白质约占40%，糖类约占1%~10%）
    核孔复合体主要由3部分组成：①柱状成分形成核孔壁；②环状成分向孔中央伸出8个圆锥状的辐，呈辐射状分布；③腔成分，由大的跨膜糖蛋白组成，认为可有助于把核孔复合体锚定在核膜，核孔复合体的核侧和胞质侧向外伸出细纤维。核孔中央有一中央栓。
    核孔是核质和胞质之间分子及颗粒双向交换的通道，具有选择性，只允许某些小分量的分子通过。核孔复合体的通道是一条充满液体、直径9 nm、长约15 nm的柱状通道，使水溶性分子穿梭运动于核质与胞质之间。核被膜起一种屏蔽作用，使核质不受到很多胞质中颗粒、纤维大分子的作用。例如成熟的胞质中的核糖体太大不能通过9 nm的核孔通道，因而确保蛋白质的合成在胞质中进行。核内是RNA合成及核糖体亚基合成和组装的部位，因而必须通过核孔运到胞质中，而核不均一性核糖核酸（hnRNA）不能通过核孔，它们必须剪接加工后成为mRNA才能通过。

2 简述线粒体内氧自由基产生的分子机制及线粒体在细胞凋亡调节中的作用（15分）

3 简述免疫细胞发育过程和T细胞检测标准，分析爱滋病毒感染细胞的途径（10分）
答：免疫细胞广义概念包括：造血干细胞系、淋巴细胞系、单核吞噬细胞系、粒细胞系、肥大细胞系、红细胞系、以及血小板等。它们都共同来源于造血干细胞。

4、简述神经细胞突触细胞传递的结构基础和信号传导分子机制（15分）
答：突触指神经元之间或神经元和效应器在形态上发生接触和有传递功能的部位。通过突触可使神经冲动信息定向传导，对信息进行传递和收集是突触的主要功能。
按信息传递方式不同，突触可分为电突触和化学突触
电突触：可以直接传递电信号。主要指两个神经元之间的缝隙连接。两个神经元之间距离2 nm，并在膜上有连接蛋白亚单位组成的微小通道，可容小分子物质通过。这种连接电阻低，离子通过连接时不会渗漏，因此电突触可以从突触前向突触后传导。传导方向决定于两个神经元之间的关系。电突触可有双向传递和传导作用。
化学突触：是释放神经递质而传导神经冲动的突触。化学突触包括突触前突起终末、突触间隙和突触后膜三部分。
突触前突起终末：包括突触前膨大和突触前膜。突触前膨大通常是一个释放递质的神经元轴突的末梢，胞质内有微管、神经细丝、线粒体和许多突触小泡。突触前膜(presynaptic membrane):突起末梢端的胞膜，突触前膜与小泡接触处形成小的隆起，是突触小泡的开口处。突触前膜的内面有致密物附着处，连同聚集的小泡被认为是突触前活化区。
突触间隙（synaptic cleft）：前一个神经元突触前膜与后一个神经元的胞体或树突之间的间隙，间隙中含有蛋白质和多糖类。
突触后膜（postsynaptic membrane）：是一个有受体的神经元的胞体、树突或轴突的胞膜。胞质面有致密物附着。这些受体以某种方式控制突触后膜对离子的通透性。
信号传导机制：当神经脉冲到达末梢时，膜电位降低（去极化），暂时打开突触前膜的电位门控Ca2+通道。Ca2+大量流入神经末梢，刺激突触泡与前膜融合，神经递质被释放到突触裂缝内。游离Ca2+浓度的升高是短暂的，因为Ca2+结合蛋白、隔离Ca2+小泡和线粒体能迅速摄取进入轴突末梢的Ca2+。神经递质经扩散到达突触后细胞，并与其膜受体结合。神经递质的受体有两类：一类是配体门控离子通道，将化学信号又重新转变为电信号；另一类受体通过胞内信使调节细胞代谢，最后引起各种生理效应。存于突触裂缝的神经递质迅速被酶分解，或被分泌它的前突触重吸收。
5 利用真核基因表达调控的原理，阐述利用体细胞进行动物克隆的分子基础和生物学意义。谈谈您对克隆人的看法（15分）
答：动物克隆：指通过核移植（无性繁殖）生产遗产结构与细胞核供体相同动物个体的技术。发育早期的动物胚胎细胞或成年动物体细胞的细胞核，经显微手术移植到去细胞核的卵母细胞中后，在适当条件下，可以重新发育成正常胚胎。这种胚胎被移植到生殖周期相近的母体中，可以发育成正常动物个体。经过核移植产生的动物，其遗传结构与细胞核供体完全相同。
分子基础：细胞全能性，即已分化的体细胞的细胞核中含有发育成完整个体所需的全部基因，在适当条件下可以发育成完整个体。（细胞经分裂和分化后仍具有形成完整有机体的潜能和特性）。全能性的物质基础是细胞内含有本物种全套遗传物质。
生物学意义：
①应用克隆技术，繁殖优良物种。常规育种周期长还无法保证100％的纯度；用克隆这种无性繁殖，就能从同一个体中复制出大量完全相同的纯正品种，且花时少、选育的品种性状稳定，不再分离。
②建造动物药厂，制造药物蛋白。利用转基因技术将药物蛋白基因转移到动物中并使之在乳腺中表达，产生含有药物蛋白的乳汁，并利用克隆技术繁殖这种转基因动物，大量制造药物蛋白。
③建立实验动物模型，探索人类发病规律。
④克隆异种纯系动物，提供移植器官。采用克隆技术，可先把人体相关基因转移到纯系猪中，再用克隆技术把带有人类基因的特种猪大量繁殖产生大量适用器官，且能同时改变器官的细胞表面携带人体蛋白和糖分特性，当猪的器官植入病人体内时，免疫排异反应减弱，成功率提高，用起来也更加安全。
⑤拯救濒危动物，保护生态平衡。克隆技术的应用可望人为地调节自然动物群体的兴衰，使之达到平衡发展
  克隆人的弊端：
①    文化层面，克隆人是对自然生殖的替代和否定，打破了生物演进的自律性，带有反自然性质，与崇尚天人合一、回归自然的基本文化相悖。
②    哲学层面：通过克隆技术实现人的自我复制和自我再现后，可能导致人身心关系紊乱，人的不可重复性和不可替代性的个性规定因大量复制而丧失了唯一性，丧失了自我及个性特征的自然基础和生物学前提。
③    学员生育构成了社会结构和社会关系，克隆人的出现，打破了这一关系。
④    身份和社会权利难以分辨。
⑤    在伦理学上，克隆人行为涉及到严重的伦理问题，它侵犯了伦理学的基本原则，如不伤害、自主、平等原则等。并且让生命不再宝贵。因此，坚决反对克隆人。

中国科学院动物研究所细胞生物学2004年博士研究生入学试题
一、名词解释及英文名称（2.5分/题，共25分）
1.  信号肽：signal peptide，
2.  细胞外基质：extra cellular matrix;ECM，由动物细胞合成并分泌到胞外、分布在细胞表面或细胞之间的大分子, 主要是一些多糖、蛋白, 或蛋白聚糖，包括纤维性成分(胶原蛋白、弹性蛋白和网织蛋白)、连接蛋白(纤维粘连蛋白、层粘连蛋白)和空间充填分子(主要为糖胺聚糖)等。这些物质构成复杂的网架结构，支持并连接组织结构、调节组织的发生和细胞的生理活动，对细胞增殖和分化发挥重要调控作用。
3. DNA损伤检测点：DNA damage checkpoint，细胞周期中，当外界条件引起DNA损伤时，细胞对DNA损伤做出迅速反应的检查点。通过该点激活发生一系列生化事件，将细胞阻断在G1期和G2期，同时诱导修复基因的转录与表达，保证了细胞周期高度准确地进行运转。
4.胚状体：embryoid，在离体植物细胞、组织或器官培养过程中，由一个或一些体细胞，经过胚胎发生和发育过程，形成与合子胚相类似的结构。
5.高尔基体：
6.光合磷酸化：(photophosphorylation)，是植物叶绿体的类囊体膜或光合细菌的载色体在光下催化腺苷二磷酸（ADP）与磷酸（Pi）形成腺苷三磷酸（ATP）的反应。分为：循环式光合磷酸化和非循环式光合磷酸化。前者是在光反应的循环式电子传递过程中同时发生磷酸化，产生ATP。后者是在光反应的非循环式电子传递过程中同时发生磷酸化，产生ATP。在非循环式电子传递途径中，电子最终来自于水，最后传到氧化型辅酶Ⅱ（NADP+）。因此，在形成ATP的同时，释放氧并形成还原型辅酶Ⅱ（NADPH）。
7.细胞骨架：cytoskeleton，狭义的细胞骨架指真核细胞中与保持细胞形态结构和细胞运动有关的纤维网络，包括微管、微丝和中间纤维。广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质。
8.基因阻遏蛋白：（repressor protein）是原核生物中由调节基因表达的一种调控蛋白，具有抑制特定基因（群）产生特征蛋白质的作用。由于它能识别特定的操纵基因（即操纵子是阻遏蛋白的结合位点），当操纵序列结合阻遏蛋白时会阻碍RNA聚合酶与启动序列的结合，或使RNA聚合酶不能沿DNA向前移动，阻遏转录，介导负性调节，因而可抑制与这个操纵基因相联系的基因群，也就是操纵子的mRNA合成。
9.基因敲除：gene knock-out，将细胞基因组中某基因去除或使基因失去活性的技术。广义的基因敲除包括某个或某些基因的完全敲除、部分敲除、基因调控序列的敲除以及成段基因组序列的敲除。常用同源重组的方法，用以观察生物或细胞的表型变化，是研究基因功能的重要手段。
基因敲除是基因打靶技术的一种，类似于基因的同源重组。指外源DNA与受体细胞基因组中序列相同或相近的基因发生同源重组，从而代替受体细胞基因组中的相同/相似的基因序列，整合入受体细胞的基因组中。此法可产生精确的基因突变，也可正确纠正机体的基因突变。
10. 减数分裂：meiosis，指有性生殖的个体在形成生殖细胞过程中发生的一种特殊分裂方式，仅发生在生命周期某一阶段。减数分裂过程中染色体仅复制一次，细胞连续分裂两次，两次分裂中将同源染色体与姊妹染色体均分给子细胞，使最终形成的配子中染色体仅为性母细胞的一半。受精时雌雄配子结合，恢复亲代染色体数，从而保持物种染色体数的恒定。
二、请写出英文全称及简述此概念（1.5分/题，共15分）
1.    RNAi: RNA干扰，与靶基因同源的双链RNA诱导的特异转录后基因沉默现象。作用机制是双链RNA被特异的核酸酶降解，产生干扰小RNA(siRNA)，这些siRNA与同源的靶RNA互补结合，特异性酶降解靶RNA，从而抑制、下调基因表达。已经发展成为基因治疗、基因结构功能研究的快速而有效的方法。
2.    CSF：colony stimulating factor,集落刺激因子，是由活化的T细胞、单核吞噬细胞、血管内皮细胞和成纤维细胞等产生的，可刺激造血干细胞和不同发育阶段的造血细胞的增殖分化。不同CSF可刺激不同发育阶段的造血干细胞和祖细胞增殖、分化，在半固体培养基中形成相应细胞集落，还可促进成熟细胞的功能。
3.    FGF：fibroblast growth factor,成纤维细胞生长因子，由垂体和下丘脑分泌的多肽，有酸性（    pI5.6）和碱性（pI 9.6）两种，能促进成纤维细胞有丝分裂、中胚层细胞的生长，还可刺激血管形成，在创伤愈合和肢体再生中发挥作用。
4.    FISH：fluorescent in situ hybridization,荧光原位杂交，一种组织化学检测技术，使用荧光素标记探针，检测探针和分裂中期的染色体或分裂间期的染色质的杂交。基本原理：将DNA或RNA探针用特殊的核苷酸分子标记，然后将探针直接杂交到染色体或DNA纤维切片上，再用与荧光素分子偶联的单克隆抗体与探针分子特异性结合来检测DNA序列在染色体或DNA纤维切片上的定性、定位、相对定量分析.FISH具有安全、快速、灵敏度高、探针能长期保存、能同时显示多种颜色等优点,不但能显示中期分裂相,还能显示于间期核。
5.    PCR：聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction），是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火（复性）及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究，还可用于疾病的诊断或任何有DNA,RNA的地方．聚合酶链式反应（PCR）又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。
6.    TCR：T cell receptor，为异源二聚体，分为T细胞受体α/β及T细胞受体γ/δ两类，前者可特异性识别抗原提呈细胞表面的抗原肽-MHC复合物。T细胞抗原受体(TCR)样性(个体水平)最终可达到1015～1018，形成容量庞大的TCR库，赋予个体几乎无限的抗原识别和应答能力，保证个体在多变环境中能和外来抗原(病原体)发生有效的免疫应答。
7.    PCD：programmed cell death，程序性细胞死亡，又称细胞凋亡，指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。生物体内细胞在特定的内源和外源信号诱导下，其死亡途径被激活，并在有关基因的调控下发生的程序性死亡过程。是程序性死亡过程的一种主要形式，强调的是形态学上的改变。它涉及染色质凝聚和外周化、细胞质减少、核片段化、细胞质致密化、与周围细胞联系中断、内质网与细胞膜融合，最终细胞片段化形成许多细胞凋亡体，被其他细胞吞入。
8.    H-ATPase：植物细胞、真菌（包括酵母）和细菌细胞质膜上的H+泵，将H+泵出细胞，建立跨膜的H+电化学梯度，驱动转运溶质进入细胞。真核细胞中存在3种：①P型，在转运H+过程中涉及磷酸化和去磷酸化，存于真核细胞膜上；②V型，转运H+过程中不形成磷酸化的中间体，存于动物细胞溶酶体膜和植物细胞液泡膜，从细胞质基质中泵出H+进入细胞器，有助于保持细胞质基质中性pH和细胞器内的酸性pH；③E型，存于线粒体内膜、植物内囊体膜和多数细菌质膜上，H+顺浓度梯度运动，将所释放的能量与ATP合成偶联起来。
9.  MHC：major histocompatibility antigen,主要组织相容性复合体，由一群紧密连锁的基因群组成，定位于动物或人某对染色体的特定区域，呈高度多态性。其编码的分子表达于不同细胞表面，参与抗原递呈，制约细胞间相互识别及诱导免疫应答。编码产物是抗原提呈和T细胞活化的关键分子，在启动特异性免疫应答和免疫调节中起重要作用。器官移植中MHC是决定个体间组织相容性的主要基因，参与移植物排斥。
10. PKC ：protein kinase C，蛋白激酶C，是G蛋白偶联受体系统中的效应物，在非活性状态下是水溶性的，游离存在于胞质溶胶中，激活后成为膜结合的酶。当DAG在质膜中出现时，胞质溶胶中的蛋白激酶C被结合到质膜上，然后在Ca2+的作用下被激活。蛋白激酶C属于多功能丝氨酸和苏氨酸激酶。
蛋白激酶C能激活细胞质中的靶酶参与生化反应的调控, 同时也能作用于细胞核中的转录因子, 参与细胞的生长和分化相关基因表达的调控。
三、简述题（5分/题，共30分）
1.    简述细胞周期的检测方法及其优缺点
答：（1）脉冲标记DNA复制和细胞分裂指数观察测定法
用3H-TdR短期饲养细胞，数分钟至半小时后，将3H-TdR洗脱，置换新鲜培养基并继续培养。随后，每隔半小时或一小时定期取样，作放射自显影观察分析，从而确定细胞周期各个时期的长短。
经3H-TdR短暂标记后，凡处于S期的细胞均被标记。置换新鲜培养液培养一定时间，被标记细胞陆续进入M期。最先进入M期的标记细胞是被标记的S其最晚期细胞。所以，从更换培养基培养开始，到被标记的M期开始出现，所经历的时间为G2期时间（TG2）；从被标记的M期细胞开始出现，到其所占M期细胞总数的比例达到最大值，所经历的时间为M期时间（TM）；从被标记的M期细胞数占M期细胞总数的50%开始，经历最大值再下降到50%，所经历时间为S期时间（TS2）。从被标记M期细胞开始出现并逐渐消失，到被标记M期细胞再次出现，所经历时间为一个细胞周期总时间（Tc）。Tc减去TG2、TM、TS后剩余时间为TG1。
优点：不仅可测定细胞周期总时间，还可同时测出各个时期所持续的时间，结果分析直截了当。
缺点：用放射性同位素要求专门设备，实验操作也要格外小心谨慎。放射性同位素本身对细胞周期有一定影响。当细胞群体组成复杂，细胞周期时间长短不一致，有的细胞处于静止期等，很难得到规则的工作曲线，更难得到正确的细胞周期时间。
（2）流式细胞仪测定法
细胞周期中的细胞DNA含量不同，G1期和G2/M期含固定的DNA含量，分别为1 C和2 C（2n 和4n）,S期细胞DNA含量介于1C和2 C之间。用流式细胞仪测定细胞周期，可以通过监测细胞DNA含量在不同时期内变化，从而确定细胞周期时间长短，也可以直接标记DNA复制，统计细胞数量和被标记的分裂期细胞百分比，对细胞周期进行综合分析。
优点：可以逐个分析细胞或颗粒物的某个参数，也可结合各种细胞标记技术，同时分析多个参数。还可对某个细胞群体中的各种细胞进行分拣。

2.    简述基因敲除小鼠产生的方法及原理
答：基因敲除小鼠：通过DNA同源重组，使得胚胎干细胞特定的内源基因被破坏而造成其功能丧失，然后再通过胚胎干细胞的发育获得缺失某特定基因的小鼠。
方法：（1）从小鼠胚胎上提取干细胞；
      （2）同时构建靶载体，靶载体中含有与靶基因同源的DNA片段；
      （3）将靶载体转染到干细胞中；
      （4）将筛选后获得的含有靶载体的干细胞进行扩增；
      （5）将含有靶载体的干细胞注入小鼠胚胎；
      （6）胚胎发育为嵌合体小鼠（部分器官为该改造后的干细胞发育而成）后，通过选择性培育（将嵌合体小鼠与正常小鼠交配，在下一代中进行筛选），获得基因敲除小鼠（全部器官为该改造后的干细胞发育而成）。