方法：菌种保藏的方法很多，采取哪种方式，要根据保藏时间、微生物种类、具备的条件而定。
1）可保藏菌种数十年的有效方法——冷冻干燥保藏法
2）可长期保藏菌种的方法——液氮保藏法
3）斜面保藏法：细菌、放线菌、霉菌、酵母菌均可采用，此法简单，存活率高，故应用较普遍。
4）液体石蜡覆盖保藏法：主要适用于霉菌、酵母菌、放线菌、好氧性细菌等的保存。
5）载体保藏法：主要用于能形成孢子或孢子囊（真菌、放线菌和部分细菌）的保存，此法简便，应用范围广。
6）悬液保藏法：酵母菌、霉菌和放线菌的大部分均适用此法保藏，操作方法简便
7）宿主保藏法：寄生微生物保存的最佳选择
菌种保藏中的退化与复壮：
退化：群体中退化的细胞在数量上占一定数值后，表现出菌种生产性能下降的现象，常表现为在形态上分生孢子减少或颜色改变，甚至变形，在生理上常指产量下降。
复壮：在退化菌种中，用人工方法，仍使保持原有特性的细胞生长、繁殖，以更新退化的菌株，称为菌种复壮。
菌种衰退的原因？怎样防止菌种衰退？
菌种衰退的原因：
（1）自然突变：在DNA大量快速复制过程中出现的基因差错而导致的突变
（2）环境条件：如培养基的营养成分、环境温度均有重要的作用。其它因子，如紫外线等诱变剂也可加速菌种退化。
怎样防止菌种衰退：
1）控制传代次数：尽量避免不必要的移种和传代，并将必要的传代降低到最低限度，以减少细胞分裂过程中所产生的自发突变几率。
2）创造良好的培养条件：如在赤霉素生产菌的培养基中加入糖蜜、天冬酰胺、谷氨酰胺、5’-核苷酸、或甘露醇等丰富营养物时，有防止衰退效果。
3）利用不易衰退的细胞传代：对于霉菌，菌丝细胞常含有几个细胞核，因此用菌丝接种就易出现衰退，而孢子一般是单核的，用于接种就可避免这种现象。
4）采用有效的菌种保藏方法
5）合理的育种：选育菌种时所处理的细胞应是单核的，避免使用多核细胞，合理选择诱变剂种类或增加突变位点，以减少分离回复突变，诱变处理后及时分离纯化，保证保藏菌种的纯度
6）选用合适的培养基：在培养基中添加某种化学物质可防止菌种退化。
设计从自然界中筛选微生物的实验方法：
筛选以苯为碳源的菌株：
1）从苯含量较高的环境中采集土样或水样
2）配制培养基，制备平板，一种以苯作为唯一碳源（A），另一种不含任何碳源作为对照（B）
3）将样品适当稀释（十倍稀释法），涂布A平板
4）将平板置于适当温度条件下培养，观察是否有菌落产生
5）将A平板上的菌落编号并分别转接至B平板，置于相同条件下培养（在B平板上生长的菌落是可利用空气中二氧化碳的自养型微生物）
6）挑取在A平板上生长而不在B平板上生长的菌落，在一个新的A平板上划线、培养，获得单菌落，初步确定为可以利用苯作为碳源和能源的微生物纯培养物
7）将初步确定的目标菌株转接至以苯作为惟一碳源的液体培养基中进行摇瓶发酵实验，利用相应的化学分析法定量分析该菌株分解利用苯的情况、
固氮菌株的筛选：
1）根据选择分离的原理设计不含氮的培养基，在这种培养基上生长的细菌，其氮素应来自固氮作用
2）将环境样品（如土样）稀释涂布到选择平板上，放置于厌氧罐中。对厌氧罐采用物理、化学方法除去氧气，保留氮气。培养后在平板上生长出来的细菌应是厌氧固氮菌或兼性厌氧固氮菌。
3）挑取一定数量的菌落，对应点种到两块缺氧的选择平板上，分别放置于厌氧罐内、外保温培养。在厌氧罐内外均能生长的为兼性厌氧固氮菌，而在厌氧罐外的平板上不生长，在厌氧罐内的平板上生长的即为可能的厌氧固氮菌。
4）对分离得到的厌氧固氮菌菌落样品进行系列稀释，涂布于相应的选择平板，重复上述步骤直到获得厌氧固氮菌的纯培养。
1、采样：腐叶烂草或其土壤，做好标记。
2、增殖培养：控制营养成分，以纤维素为唯一碳源。
3、分离：划线或稀释法。
4、筛选：初筛：生长圈法，复筛：摇瓶测酶活性。
5、鉴定：形态、生理、工艺参数、毒性试验。
第三章  微生物细胞的结构与功能
真核微生物：凡是细胞核具有核膜、细胞能进行有丝分裂、细胞质中存在线粒体同时存在叶绿体等细胞器的生物称真核生物。微生物中的真菌、显微藻类原生动物和地衣均属于真核生物，故可称为真核微生物。
原核微生物：是指一大类细胞微小、细胞核无核膜包裹（只有称作核区的裸露DNA）的原始单细胞生物。
肽聚糖：真细菌细胞壁的特有成分，由无数肽聚糖单体以网状形式交联而成。肽聚糖单体由肽与聚糖两部分构成，其中的肽由四肽尾和肽桥构，聚糖则由N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸以ß-1,4糖苷键相互间隔交联而成，呈长链骨架状。G+细菌的四肽尾一般由L-Ala、D-Glu、L-Lys、D-Ala4个氨基酸构成，肽桥则由5个Gly残基构成；G-细菌的四肽尾一般由L-Ala、D-Glu、m-DAP和D-Ala构成，且无肽桥。
脂多糖（LPS）：位于G-细菌细胞壁最外层的一层较厚（8-10nm）的类脂多糖类物质，由类脂A、核心多糖和O-特异侧链3部分构成，是G-细菌致病物质内毒素的成分。
细菌细胞膜的结构、组成与功能：
细胞膜结构：     
              磷脂双分子层
    细胞膜
              蛋白质
细胞膜的功能：
1）选择性地控制细胞内外的营养物质和代谢产物的运送
2）维持细胞内正常渗透压的屏障
3）合成细胞壁和糖被的各种组分
4）膜上含有氧化磷酸化或光和磷酸化等能量代谢的酶系，是细胞产能场所
5）是鞭毛基体的着生部位和鞭毛旋转的供能部位
6）膜上某些蛋白受体与趋化性有关。
细菌细胞壁的结构、组成与功能：

                                    聚糖链： —（G+M）n—