微生物学复习重点 考研复习必备(13)
本站小编 免费考研网/2016-08-08
三、细胞分化现象
在某些微生物的发育循环中,一个或一群细胞会从一种形态与功能转变为另一种形态与功能,此称细胞分化或形态发生。
2节:微生物纯培养的生长
一、纯培养的分离方法 表
二、生长测定(适用、注意事项)
直接计数法(全数)
间接计数法(活菌数)
测细胞物质量
三、细菌纯培养群体生长规律
将少量纯培养接种到一恒定体积的新鲜液体培养基中,适宜条件下培养,定时取样测定细菌含量,以培养时间为横坐标,以细菌数目的对数或生长速率为纵坐标,得繁殖曲线,对单细胞而言,又称生长曲线。
根据生长速率不同,分为几个时期。
(一)延迟期 lag phase(停滞期、调整期)
表现:不立即繁殖,生长速率近于0,菌数几乎不变,细胞形态变大。
特点:分裂迟缓,合成代谢活跃,体积增长快,对外界不良环境敏感。
原因:调整代谢,合成新的酶系和中间代谢产物以适应新环境。
消除:增加接种量;采用最适菌龄接种;培养基成分(种子、发酵)
(二)对数期 log phase
表现:代谢活性最强,几何级数增加,代时最短,生长速率最大。
特点:细菌数目增加与原生质总量增加,与菌液浊度增加呈正相关性。
代时(generation time):单个细胞完成一次分裂所需时间,亦即增加一代所需时间。
G=t1-t0/n y=xo2n n=lgy - lgx/lg2
导出 G = t1 - t0 /3.3(lgy - lgx)
影响G因素:菌种、营养成分、营养物浓度(很低时影响)、培养温度。
(三)稳定期 stationary phase(最高生长期、静止期)
表现:新增殖细胞数与老细胞的死亡数几乎相等,活菌数动态平衡。
特点:生长速率又趋于0,细胞总数最高。
原因:养分减少;有毒代谢物产生。
稳定期细胞内开始积累贮存物,此阶段收获菌体,也是发酵过程积累代谢产物的重要阶段。
延长:补料,调pH、温度等。
此时,菌体总数量与所消耗的营养物之间存在一定关系,称为产量常数(生长效率)。Y = X - X0 /C
其中X-稳定期细胞干重/ml, X0 -接种时干重/ml,C-限制性营养物浓度。
根据这一原理,可进行生物测定。
将未知混合物加到只缺乏特定限制性营养物的完全培养基中,测定培养基所能达到的生长量,就可以计算出原混合物中特定限制性营养物的浓度。
(四)衰亡期 decline phase
表现:出现 "负生长 ",有些细胞开始自溶。
对于丝状真菌,细胞数目不呈几何级数增加,无对数生长期,一般有调整期,最高生长期,衰退期。
四、连续培养 continuous cultivation
分批培养 batch culture :将微生物置于一定容积的培养基中,经过培养生长,最后一次收获。
若不断补充新鲜营养,并及时不断以同样速度排出培养物,则可延长对数期。
只要培养液的流动量能使增殖的新菌数相当于流出的老菌数,就可保证总菌量不变,此即连续培养原理。
主要参数:D(稀释率)=F(流动速率)/V(容积)
连续培养方法
1、恒浊连续培养 turbidostat
不断调节流速使培养液浊度保持恒定。
装置
适用:收获菌体及与菌体相平行的产物。
2、恒化连续培养 chemostat
恒定流速,及时补充营养,营养物浓度基本恒定,从而保持恒定生长速率。又称恒组成连续培养。培养基成分中,必须将某种必需的营养物控制在较低的浓度,以作为限制性因子,而其它营养物过量。常用的有氨、氨基酸、葡萄糖、生长因子、无机盐等。
适用;科研
两种方法比较:
五、同步生长 synchronous growth
概念:使所有的细胞都能处于同一生长阶段,同时分裂的生长方式。
同步培养法获得:
(一)机械法(选择法)
1、离心沉降分离法
2、过滤分离法
3、硝酸纤维素薄膜法
(二)调整生理条件法(诱导法)
1、温度调整法:亚适生长温度-->最适生长温度培养。
2、营养条件调整法:控制浓度或组成,使细胞只能进行一次分裂。
3、用稳定期的培养物接种:稳定期细胞处于衰老状态,移入新鲜培养基,可得同步生长。
(三)抑制DNA合成法
DNA合成是细胞分裂前提。抑制一段时间再解除抑制。
3节:环境条件对生长影响
一、温度
影响两方面。
最低、最适、最高生长温度,致死温度。
微生物生长温度类型:
低温型(嗜冷微生物)
中温型(嗜温微生物)
高温型(嗜热微生物)
二、pH
主要影响:引起膜电荷变化,从而影响营养吸收;影响酶活性;改变营养物状态和有害物毒性。
有最适pH,此时酶活性最高,其他条件适合,生长速率最高,但不是生产的最适pH。
微生物细胞内的pH多接近于中性。
pH调节措施:
三、氧化还原电位 Eh
Eh与氧分压有关,也与pH有关。
不同种类微生物所要求的Eh不同。
Eh影响酶活性,也影响呼吸作用。
四、辐射
指通过空气或外层空间以波动方式从一个地方传播或传递到另一个地方的能量。
(一)紫外线(非电离辐射)10-380nm
致死主要是细胞中很多物质对紫外线吸收。杀菌作用随剂量增加而增加。紫外线穿透力弱,应用于空气消毒、表面消毒、菌种诱变。
(二)电离辐射(X、α、β、γ)
效应无专一性, α、β穿透力较弱,X、 γ较强。
KI对电离辐射具保护作用。
五、干燥
水分对正常生长必不可少,各种微生物抵抗干燥能力不同。
六、渗透压
微生物对渗透压有一定适应能力。高渗溶液-质壁分离,低渗溶液-细胞膨胀破裂。
七、超声波(20,000Hz以上)
使细胞破裂,科研中破碎细胞。
八、表面张力
4.5--6.5x10-4 N/cm,降低影响。
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